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目的:(1)研究3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有胆碱能系统物质的mRNA和蛋白表达。(2)探讨3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中烟碱样乙酰胆碱受体(nAChR)α7的功能状态对脂肪因子肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)mRNA表达的影响,初步阐明脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统与肥胖、胰岛素抵抗及其它脂代谢相关疾病的关系。
方法:(1)以体外培养的3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,采用免疫组化(SP法)检测前脂肪细胞中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)和烟碱样乙酰胆碱受体α7(nicotinic acetylcholine receptor,nAChRα7)三种胆碱能系统主要组分的蛋白表达和定位、再用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术(Western blotting)方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有此三种组分的mRNA和蛋白表达;(2)对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞分别给予不同浓度的广谱nAChR激动剂尼古丁、特异性nAChRα7激动剂氯化胆碱及特异性nAChRα7拮抗剂甲基牛扁亭碱处理12h、24h、36h,并设立相应处理时间的空白对照组,应用RT-PCR方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA的表达情况。
结果:(1) 证实在3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中均有AChE、ChAT、AChRα7mRNA和蛋白的表达。(2)给予不同剂量的尼古丁和氯化胆碱,干预作用不同时间,3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达水平与对应的空白对照组相比均呈剂量依赖性升高(P<0.05或P<0.01),但随着干预作用时间延长,这种剂量依赖性上调效应减弱。两种激动剂以氯化胆碱的剂量依赖性上调效应更为明显。而相同剂量下不同作用时间的处理组之间无显著差异(P>0.05)。(3)拮抗剂甲基牛扁亭碱对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达则呈明显的剂量依赖性抑制作用(P<0.05或P<0.01)。
结论:3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中存在非神经元型胆碱能系统,其中nAChRα7的功能状态对脂肪因子AM mRNA表达有显著影响,脂肪组织中非神经元型胆碱能系统的重要组分nAChRα7可能在肥胖、胰岛素抵抗及其它脂代谢相关疾病的病理生理过程中发挥重要作用。