苦丁茶冬青苦丁茶多酚类物质的生物活性及分离纯化研究

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苦丁茶是我国南部和东部地区人民饮用的一种代用茶,苦丁冬青苦丁茶是其3个主要品种之一。其所含各种成分的药理作用及保健功能日益引起人们的关注。苦丁茶冬青资源丰富,但因其口感苦涩,很难作为日常饮品推广,若能将苦丁茶冬青苦丁茶进行深加工,提取有效活性成分,增加产品附加值,具有十分重要的经济价值和现实意义。本研究评价了苦丁茶冬青苦丁茶粗提物的体内、体外抗氧化,抗肥胖以及抗肿瘤活性,利用大孔树脂对苦丁茶冬青苦丁茶多酚类物质进行初步分离纯化并对初步纯化多酚组成进行HPLC及LC-MS检测;结果如下:采用DPPH法、ABTS法和还原力的测定的测定等3种方法测定苦丁茶冬青苦丁茶粗提物的体外抗氧化活性,结果表明苦丁茶冬青苦丁茶多酚具有较强的体外抗氧化功能。运用动物模型实验研究分析了苦丁茶冬青苦丁茶多酚的体内抗氧化活性。结果表明:应用低剂量处理可克服D-半乳糖诱导的氧化损伤;应用高剂量处理可以显著地抑制肝脏和血清中脂质过氧化产物(MDA)的生成,显著地提高肝脏和血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及非酶性抗氧化能力(TAOC),且这种变化与苦丁茶冬青苦丁茶多酚呈现剂量依赖关系。通过评价对三种消化酶-α-淀粉酶,胰脂肪酶以及α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用,初步分析了苦丁茶冬青苦丁茶多酚的抗肥胖功能。结果表明:苦丁茶冬青苦丁茶多酚对α-淀粉酶活性有较强的抑制作用(IC50=18μg/mL)。对胰脂肪酶的抑制作用次之,对葡萄糖苷酶的活性相对较弱。采用MTT法测定了苦丁茶冬青苦丁茶对人肝癌细胞株Hep-G2细胞以及胃癌细胞株BGC-823细胞的体外增殖的影响,通过比较不同作用浓度下苦丁茶多酚对于癌细胞的抑瘤率,初步探讨其对胃癌及肝癌细胞的作用效果。结果表明:苦丁茶冬青苦丁茶的抑瘤率与其浓度间均存在剂量依赖关系,在相同时间条件下,随浓度的升高,抑瘤率逐渐增强。750μg/mL苦丁茶多酚对Hep-G2抑瘤率达80%;1mg/mL苦丁茶多酚对BGC-823细胞抑瘤率达88.94%应用大孔树脂对苦丁茶冬青苦丁茶多酚类物质进行初步分离纯化。从7种常用大孔树脂中筛选出HP20型树脂进行分离纯化实验。从Langmuir吸附曲线可以看出理论最大吸附量Qm为114.94mg/g,吸附平衡KL参数为1.359mL/mg;Freundlich吸附曲线中KF为71.5mg/g,1/n为0.2173说明HP-20大孔树脂对苦丁茶多酚有很好的吸附作用。上样液pH值为4时可保持树脂的最大吸附。对洗脱液pH的研究表明最佳洗脱PH值为10洗脱率最高。最佳洗脱剂用量是6倍柱体积。采用HPLC和LC-MS联用技术对初步纯化后的苦丁茶冬青苦丁茶多酚进行分析,结果表明,苦丁茶多酚主要为咖啡酰奎宁酸衍生物,主要为3-CQA、4-CQA、5-CQA,3,4-diCQA、3,5-diCQA和4,5-diCQA。大孔树脂水洗脱部分基本为一取代物,而乙醇洗脱部分基本为二取代物。
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