马铃薯纺锤块茎类病毒的RT-PCR检测及试管薯工厂化生产技术研究

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leocaan
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以感染PSTVd的马铃薯试管苗及块茎和健康的试管苗及块茎为材料,对提取植物总 RNA的两种方法进行了比较,结果表明:酚/SDS法和试剂盒法对感病马铃薯试管苗的提取均获得了纯度高、完整性好的总RNA;对感病块茎提取时试剂盒法获得了纯度高、完整性好的总RNA,而酚/SDS法提取时不能有效地除去块茎中蛋白质等杂质。酚/SDS法提取试管苗总RNA,扩增电泳后观察结果好于试剂盒法,而以未感病试管苗扩增产物为对照,未得到任何产物。  以总RNA为模板,进行cDNA合成及PCR扩增,从感病组织扩增到一段约为359bp的特异RNA扩增产物,与理论设计大小一致,而健康组织无此扩增产物。从而在基因水平上为PSTVd的检测提供了快速、灵敏、简便的新手段。利用该方法检测了延边农业科学研究院保存的187份国内外马铃薯品种(系)资源试管苗及薯块,检测结果:有28份马铃薯品种/系资源感染了马铃薯PSTVd。  早熟马铃薯品种“Favorita”和晚熟马铃薯品种“延薯4号”在液体和固体两种不同培养方式和不同营养元素含量培养条件下,比较植株生育和干物质积累状况的影响,结果表明:马铃薯植株在试管培养条件下,其植株生育随着培养基中营养元素的增加其生长势和干物质积累也增加,液体时趋势更明显。2倍的MS液体培养基在试管苗壮苗培养上效果最佳。  在适宜的环境条件下,马铃薯试管薯膨大是受内源激素和外源激素控制,为明确不同外源激素对试管苗结薯的作用机理,比较了基本培养基的不同浓度处理组合、激素种类和浓度对晚熟马铃薯品种延薯4号试管薯形成的影响,结果表明:用2MS培养基壮苗,经诱导后的结薯率和单薯重均增加。细胞分裂素能促进试管薯的形成和发育,其中以6BA效果最显著,表现在薯块重和结薯数同时增加上。香豆素和 CCC对试管薯发育效果不明显。诱导培养基选用 MS+6BA5.0+8%白糖对晚熟马铃薯品种延薯4号试管薯诱导率高,且结薯大。  为了马铃薯试管薯工厂化生产,我们做了试管薯生产的优化试验,试验结果表明:在2MS培养基中壮苗,是获得试管薯高产的必要前提。试管苗去掉顶部后进行试管薯生产可提高成苗率和试管薯产量,当容器使用220ml广口瓶时,诱导培养基体积以50ml为宜,并且每瓶放入20个茎段时试管薯产量最高,最经济。
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