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杨树是世界上重要的经济树种,又是林木基因工程研究的模式树种。虽然已有许多杨树遗传转化成功的报道,但获得的理想植株并不多。究其原因,首先是自然界生物的多数性状往往是由多基因控制的,多数的遗传转化研究是将一个或两个外源基因转入受体杨树。为了达到培育高产、优质、多抗等性状的品种目的,需要把三个或更多有用基因导入杨树中,进行多基因操纵。 本研究通过基因枪共转化方法将枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因(SacB)、透明颤菌血红蛋白基因(vgb)、双价抗蛀干害虫基因(BtCry3A+OC-I)、调节基因JERFs等外源基因导入库安托杨(P.×euramericacana‘Guariento’)和银腺杂种杨(P.alba×P.glandulosa)中,结果如下: 1.卡那霉素筛选。共获得27株库安托杨抗性植株和41株银腺杂种杨抗性植株。 2.点杂交。结果表明,27株抗性株库安托杨中共有18株检测到阳性信号,检出率占66.7%。41株抗性株银腺杂种杨中共有29株检测到阳性信号,检出率占70.7%。此外,许多系号未能检测到阳性信号。其中库安托杨中含5个外源基因的株系有8株,3个外源基因的株系有7株,含2个外源基因的株系有2株,1个外源基因的株系有1株。银腺杂种杨中含5个外源基因的株系有8株,含4个外源基因的株系有6株,含3个外源基因的株系有6株,2个外源基因的株系有2株,1个外源基因的株系有7株。 3.Southern杂交。依据点杂交结果,对含有全部外源基因的库安托杨抗性株进行了Southern杂交,结果表明,其中7株含有上述全部外源基因。 4.Bt-Cry3A ELISA实验。依据点杂交结果,对含有全部外源基因的库安托杨抗性株进行了Bt-Cry3A ELISA实验,结果表明,上述7株库安托杨Cry3A基因已得到表达。