牡蛎是我国重要养殖贝类，年总养殖产量居于贝类之首。三倍体牡蛎由于其育性差、生长快、品质好等诸多优于二倍体的特性而成为牡蛎养殖业的重要组成部分，深受消费者青睐。目前，三倍体牡蛎的获得主要有两种途径：一是采用理化方法抑制正常受精卵第二极体的排放，一是利用二倍体与四倍体牡蛎杂交产生100%的三倍体。国内三倍体牡蛎的生产多采用第一种途径，利用6-DMAP、温度休克等理化方法诱导。本研究中我国养殖牡蛎的主要品种——太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）和近江牡蛎（Crossostrea ariakensis）为对象，尝试通过高盐或低盐抑制受精卵第2极体的释放，诱导牡蛎三倍体。本方法安全无毒、价格低廉，适用于牡蛎三倍体产业生产，具有广阔的应用前景。研究主要分为以下两部分：一、高盐诱导太平洋牡蛎三倍体本研究中，首先通过荧光染色法显微观察太平洋牡蛎精卵受精及早期胚胎发育过程，发现23℃水温条件下，近江牡蛎在受精后25分钟左右出现第1极体（PB1）这有助于多倍体诱导时机的准确把握。其次，首次采用高盐抑制太平洋牡蛎受精卵第2机体释放产生三倍体，探索了高盐诱导三倍体最佳诱导的最适条件。在水温为25℃的条件下，分别在不同高盐处理液（盐度分别为40、45、50、55、60、65、70、75、80ppt），在不同处理时机,当首次、30%、50%出现PB1，以及首次、50%出现PB2时,将太平洋牡蛎受精卵放入处理液中，持续处理10、15、20、25min。之后将受精卵置于正常海水（盐度为35ppt）中孵化。使用300目筛绢网过滤海水获取初孵D-型幼虫，通过流式细胞仪进行倍性测定,以确定最佳诱导条件。通过诱导率及综合评价指数的分析表明，高盐诱导太平洋牡蛎多倍体的最佳参数为：盐度为65，处理时机为50%PB出现，处理持续时间20min。按照最适条件，在受精卵出现50%PB1时,以盐度65的高盐海水处理受精卵20min，幼虫的三倍体诱导率为65.53%。通过荧光学观察，太平洋牡蛎受精卵在受精后25min左右出现第一极体，30分钟左右第一极体全部排出。由此可以确定在使用高盐诱导太平洋牡蛎三倍体过程中的诱导时机的选择。最后，对使用高盐诱导的三倍体牡蛎（8月龄）进行了染色体组成观察，发现了染色体缺失现象，亦即非整倍体现象。其中二倍体水平上的染色体缺失表现为2n-1和2n-2，染色体数目为18或19条；三倍体水平上的缺失发现了2种情况，3n-1和23n-4,染色体数为29和26。非整倍体现象的出现可能与多倍体染色体组的不稳定性有关。二、低盐诱导近江牡蛎三倍体1.低盐对近江牡蛎精卵影响及海水对解剖卵的促熟作用用自然海水按一定比例加入蒸馏水，配制盐度为5，10，15，20，25，30的海水。将精子滴加入不同盐度的海水中，定时观察精子的活动情况。结果表明低盐海水对精子的活动能力有明显影响，精子的存活时间随着盐度的降低而缩短，当盐度在10及以下时，3min内精子失去运动能力；随着盐度的升高，精子的存活时间延长，盐度为25及30时，精子在2h内保持活跃状态，3h活跃度有所降低，但仍有40%以上精子活跃。盐度对牡蛎卵子的形态和受精能力也有明显影响。将卵子浸泡在不同盐度海水中10min后，发现卵子形态大小发生变化，其卵径大小与盐度间呈现出负相关趋势。浸泡25min后，受精实验结果表明，受精率与盐度之间表现出正相关趋势，卵子的受精率随着盐度降低而迅速降低，当盐度低于10ppt时，受精率为0。正常海水浸泡对牡蛎的卵子有促熟作用。浸泡时间在0.5-1.5h，牡蛎卵子具有较高的受精率，但浸泡时间再延长，至2h以后之后则出现受精率降低的现象。实验结果表明近江牡蛎体解剖卵的外促熟适宜最适时间为0.5-1.5h。2.低渗诱导近江牡蛎三倍体研究2.低渗诱导近江牡蛎三倍体，分别在20%-30%、40%-50%以及60%-70%的受精卵出现PB1时,采用不同的低盐（盐度为6、8、10、12、14、16）处理近江牡蛎的受精卵10、15、20min，然后将受精卵移入盐度为30的正常过滤海水中孵化。当孵化出D-型幼虫时，收集幼虫，DAPI荧光染色后，用流式细胞仪进行倍性测定。通过诱导率及综合评价指数的分析表明，低盐诱导近江牡蛎多倍体的最佳参数为：盐度为8，处理时机为40%-50%受精卵出现PB1，处理持续时间15min。按照实验得出的最适条件，在受精卵出现40%-50%PB1时,以盐度为6的低盐海水处理受精卵15min，幼虫的三倍体诱导率为89.03%，孵化率为80.23%，综合评价指数为71.43。研究结果显示低渗诱导对于近江牡蛎是一种十分有效的三倍体诱导方法，具有良好的生产应用前景。