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革兰氏阴性菌表达100多种脂蛋白,这些脂蛋白在细菌生长、扩增和引起宿主的天然免疫等方面发挥着重要的功能,例如:信号传导;细菌对宿主细胞的黏附;细菌之间的链接;孢子的生成;营养物质的摄取和外膜蛋白的折叠组装。脂蛋白的成熟过程需要三个定位于内膜的膜蛋白酶来接连催化完成。首先是前体脂蛋白二脂酰甘油转移酶Lgt将二脂酰甘油基团加到前体脂蛋白保守的Lip-box上的半胱氨酸的巯基的硫原子上,接着Lgt催化产生的底物被信号肽酶LspA识别并切掉其脂修饰的半胱氨酸N端的信号肽,进而露出半胱氨酸的氨基成为载脂蛋白,最后由载脂蛋白N酰基转移酶Lnt将磷脂PE或者PG的sn-1链的脂肪链加到载脂蛋白的N端的氨基的氮原子上面,产生成熟的带有三脂酰化修饰的脂蛋白。敲除上述三个酶中的任何一酶都会导致革兰氏阴性菌的死亡。脂蛋白成熟过程的前两个酶Lgt、LspA的结构都得到了解析,加深了对它们催化机制的理解。但是缺乏Lnt的三维结构及其详细的催化机制。所以研究Lnt的结构和功能有重要的意义。 解析了2.6埃分辨率的Lnt的结构,并通过基于结构和功能实验提出Lnt的催化机制。Lnt的结构支持经典的乒乓反应的机制。Lnt的结构整体来说由周质腔侧的可溶Nit结构域和跨膜结构域组成。在Nit结构域和跨膜结构域之间形成了催化活性口袋。而且Nit结构域和跨膜结构域之间的正确的定位对于Lnt的活性是必需的。 通过结合生化实验和分子动力学模拟,发现一段双亲性的Lid的柔性区域和α5-6螺旋与细胞膜的磷脂有相互作用,可以镶嵌在细胞膜上。这种相互作用能够维持Lnt在底物进出口袋时Nit结构域和跨膜结构域之间的正确定位。这种相互作用对Lnt发挥活性是必要的。同时发现了影响Lnt催化的两步反应的关键氨基酸残基。还发现磷脂DPPG和POPG能够显著提高Lnt的热稳定性。通过Lnt的结构和功能实验提出了Lnt的催化机制模型。