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研究背景急性肺损伤(ALI)和其严重形式急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是呼吸科常见急症之一,可由脓毒症诱发。细菌脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组分之一,作为革兰氏阴性细菌主要致病物质的基础,能在体内引起强烈的免疫反应。气道上皮细胞在启动和维持急性肺损伤(ALI)炎症反应过程中起着重要作用。急性肺损伤患者气道上皮细胞发生损伤、增生、死亡等改变,损伤或者死亡的气道上皮细胞通过分泌多种细胞因子和趋化因子,趋化并活化免疫细胞,启动炎症反应;且气道上皮细胞作为屏障结构被破坏,促进外来抗原直接与粘膜下层免疫细胞接触,加重炎症反应发生。Necroptosis,程序性坏死,是一种新近被发现的细胞程序性死亡方式,受主要信号分子RIPK1、RIPK3、MLKL等调节。程序性坏死被普遍认为是一种高度促炎的细胞死亡方式,在体内多种急慢性炎症中发挥重要作用,但是它是否参与急性肺损伤气道上皮细胞炎症目前国内外尚未见报道。目的:探讨RIPK3依赖的程序性坏死在急性肺损伤气道上皮细胞炎症中的作用。方法:本实验用LPS刺激人气道上皮细胞系HBE,使用流式细胞仪检测气道上皮细胞发生程序性坏死的情况,Western-Blot检测程序性坏死主要信号分子表达量的变化。结果:1.LPS诱导气道上皮细胞发生死亡LPS刺激HBE 24h,结果显示LPS增加HBE死亡比例即Annexin V+/PI++Annexin V+/PI-比例(23.90%±1.749%vs 9.056%±0.8710%,P<0.05,n=9)。2.LPS诱导气道上皮细胞发生程序性坏死,而不是凋亡或者焦亡(pyroptosis)预先使用RIPK3抑制剂dabrafenib(Da)处理,气道上皮细胞的死亡比例即Annexin V+/PI++Annexin V+/PI-比例较直接加LPS刺激明显减少(16.52%±2.264%vs 23.90%±1.749%,P<0.05,n=9);预先使用caspase泛抑制剂zVAD-fmk(Z)处理,抑制凋亡以及焦亡,气道上皮细胞的死亡比例即Annexin V+/PI++Annexin V+/PI-比例与直接加LPS刺激相比没有明显减少(18.53%±2.316%vs 22.29%±1.890%,P>0.05,n=4)。3.RIPK3-MLKL信号通路在LPS诱导的气道上皮细胞炎症中的作用LPS能够促进RIPK3作用底物MLKL的活化,即p-MLKL的表达上调;RIPK3抑制剂dabrafenib抑制RIPK3作用之后,p-MLKL的表达上调受到抑制。结论:实验结果说明LPS能诱导气道上皮细胞发生程序性坏死;LPS促进程序性坏死通路中MLKL信号分子的活化;RIPK3抑制剂dabrafenib可部分缓解LPS诱导引起的气道上皮细胞程序性坏死的发生,减少RIPK3下游信号分子MLKL的活化。