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多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是常见的共生菌或机会性病原菌,该菌宿主范围广,通常能在大多数畜禽以及野生动物的上呼吸道分离到。就畜牧养殖业而言,该菌可引发猪肺疫、禽霍乱、牛出血性败血症、兔出血性败血症等,给畜牧业生产造成巨大的经济损失。此外,Pm也是一种人兽共患病原菌。人发生本病后,主要表现为伤口感染。Pm依据荚膜抗原、菌体抗原、脂多糖抗原的差异,可分为多个血清型,各血清型之间多数无交叉免疫原性。另外,特定的疾病往往与Pm特定的血清型相关。按照荚膜分型法,禽霍乱、猪肺疫常与Pm A型菌株相关;而按照赫德尔斯顿脂多糖分型法,引起禽霍乱的菌株其脂多糖血清型常为Pm 1型和3型。然而,这些特定血清型与宿主疾病相关性的分子和细胞基础,至今仍不清楚。本研究对我国14个省份与猪肺炎相关的Pm进行了分离与鉴定。通过荚膜多重PCR、脂多糖多重PCR、毒力基因的检测、多位点序列分型等方法,对所分离的菌株进行研究,旨在了解此类菌株的流行情况以及分子特征,为防控巴氏杆菌病奠定基础。主要研究结果如下:1.猪源Pm的分离鉴定2015年~2016年从我国14省份的1597份临床猪肺炎肺脏中共分离115株Pm,分离率为7.2%。对所分离菌株进行荚膜多重PCR分型,其中A型57(50%)株,D型53(46%)株,未定型5(4%)株。2.猪源Pm的脂多糖分型对所分离的115株Pm进行脂多糖多重PCR分型,结果发现所有菌株均能定型。而脂多糖型仅有L3和L6两种,其中L3型26株,占23%,L6型89株,占77%。我们把荚膜血清型与脂多糖基因型进行组合后,发现荚膜D型菌株仅与脂多糖L6型相对应。3.猪源Pm毒力基因分布应用PCR对115株Pm的23个毒力基因进行检测,并分析这些毒力基因的分布情况。结果发现其中一些毒力基因总的检出率为100%,这些基因包括黏附因子相关基因ptfA、fimA、hsf-2;铁摄取相关基因exbB、exbD、tonB;外膜蛋白基因opmA、ompH、omp87;超氧化物歧化酶相关基因sodA、sodC。也有一些毒力基因总的检出率很低,如转铁结合蛋白基因tbpA,检出率为0,又如PMT毒素基因toxA,检出率为2.6%。在不同型(荚膜血清型、脂多糖基因型、荚膜:脂多糖组合型)的菌株间一些毒力基因的检出率有较大的差别。以荚膜分型为例,pfhA、tadD、pmHAS、hgbA基因在A型菌株中的检出率显著高于D型菌株中的检出率(P<0.05),而hsf-1、hgbB基因在D型菌株中的检出率显著高于A型菌株中的检出率(P<0.05)。同样的,以脂多糖分型为例,pfhA、tadD、pmHAS、hgbA、nanH基因在L3型菌株中的检出率显著高于L6型菌株中的检出率(P<0.05),而hgbB、nanB基因在L6型菌株中的检出率显著高于L3型菌株中的检出率(P<0.05)。通过进一步统计分析荚膜:脂多糖组合型间毒力基因的差异,首次发现pfhA等基因的检出率可能与荚膜型无关,而和脂多糖型相关。4.猪源Pm的MLST研究本研究对我国不同省份的23株Pm分离株进行MLST分型,结果发现了ST3、ST10、ST11三个ST型。而在湖北、广东等多个省份,猪源Pm不止一个ST型。ST11序列类型的菌株在我国七个省份均有分离到,表明了该类型菌株在我国分布的广泛性。因此,需要加强对此类型菌株的流行病学监测和防控。本研究中从山西、湖北、广东分离的3株产毒素Pm都属于ST11型,而本实验室先前保存的8株产毒素Pm也属于ST11型。