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三唑类和嘧啶醇类杀菌剂作为两种广泛使用的手性杀菌剂,目前已在多种环境介质中检测到残留超标,生态安全事故频发。然而关于人CYP3A4酶介导的三唑类和嘧啶醇类杀菌剂立体选择性代谢研究匮乏,分子作用机制亦不明确。本文选取叶菌唑、氯/氟苯嘧啶醇为目标化合物,分离制备了对映体,进行了关于CYP3A4酶介导代谢的立体选择性研究,从与CYP3A4酶相互作用角度,诠释了这两类杀菌剂的代谢立体选择差异性的分子机制。主要获取的结果和结论如下：(1)采用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)成功分离和制备了叶菌唑四个单一手性异构体,并利用圆二色光谱仪(Circular Dichroism, CD)和含时密度泛函理论(Time-dependent Density Functional Theory,TDDFT)鉴定了各对映体的绝对化学构型。(2)选取叶菌唑cis-RS和cis-SR两种单体,研究了人肝微粒体(Human Liver Microsome, HLM)和CYP3A4酶介导的代谢的立体选择性差异,发现叶菌唑能被HLM和CYP3A4酶降解,其中,CYP3A4酶为叶菌唑的主要代谢酶,其对叶菌唑的降解率遵循cis-RS>cis-SR.代谢过程中,对映体分数(Enantiomer Fraction, EF)由0.5逐渐增大到0.82,表明cis-RS能优先被CYP3A4酶代谢,存在显著的对映体选择性差异。(3)针对氯/氟苯嘧啶醇进行了人CYP3A4酶介导的体外代谢研究,发现氯苯嘧啶醇和氟苯嘧啶醇均能被CYP3A4酶代谢。氟苯嘧啶醇代谢速率大于氯苯嘧啶醇。氯苯嘧啶醇降解率与时间不成规律性变化,代谢无明显对映体差异；氟苯嘧啶醇代谢具有一定立体选择性差异,R型-氟苯嘧啶醇能优先被CYP3A4酶降解,并且代谢具有显著时间依赖性。(4)采用CYP3A4 Glo荧光素酶检测技术分析了叶菌唑单体对人CYP3A4酶的活性影响。通过荧光光谱技术在分子水平上研究了叶菌唑对映体单体与人CYP3A4酶结合后诱导的CYP3A4酶的构象变化,比较了不同单体结合力强弱。从相互作用角度分析了CYP3A4酶介导的叶菌唑的立体选择性代谢差异。叶菌唑是CYP3A4酶的强抑制剂,抑制效果具有浓度依赖性并遵循cis-SR>cis-RS。叶菌唑对映体cis-RS和cis-SR与CYP3A4酶结合模式各异,对CYP3A4蛋白结构微环境产生的影响不同,可能引起蛋白功能破坏程度的差异。(5)从分子间相互作用角度分析了氯/氟苯嘧啶醇与CYP3A4酶的作用机制。酶活性检测发现氯/氟苯嘧啶醇是CYP3A4酶的抑制剂,抑制效果遵循S-氟苯嘧啶醇>R-氯苯嘧啶醇>S-氯苯嘧啶醇>R-氟苯嘧啶醇。荧光光谱法结合分子对接证实了氯/氟苯嘧啶醇会导致CYP3A4酶微观结构的改变。氯/氟苯嘧啶醇对映体与CYP3A4酶的相互作用力主要为氢键和范德华力,但作用强度有所差异,顺序分别为R-氯苯嘧啶醇>S-氯苯嘧啶醇和S-氟苯嘧啶醇>R-氟苯嘧啶醇。(6)通过酵母双杂实验(Yeast Two-hybrid Assay)发现叶菌唑和氯/氟苯嘧啶醇对雄激素受体(Androgen Receptor, AR)均具有拮抗作用。叶菌唑的两个对映体ds-RS和cis-SR经人CYP3A4酶代谢后,代谢产物对人AR受体拮抗效应差别显著,cis-SR呈现代谢活化,而cis-RS表现为代谢减毒。