甜(辣)椒广泛栽培于世界各地,是重要的蔬菜之一。通常由病毒病造成甜椒减产达25%～50%,严重时造成毁种绝收。近年来,北京、保定和宁夏部分地区甜椒病毒病发生非常严重,已严重影响当地甜椒的生产,为此对上述3地部分地区甜椒毒源进行鉴定,主要结果如下: 一、通过血清学检测6种病毒(烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、辣椒轻斑驳病毒、苜蓿花叶病毒和非洲木薯花叶病毒),检测结果表明宁夏银川、惠农和平罗甜椒毒源主要为黄瓜花叶病毒,保定郊区甜椒毒源主要为辣椒轻斑驳病毒,北京郊区甜椒毒源主要为辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病毒。 二、对辣椒轻斑驳病毒寄主范围测定,发现辣椒轻斑驳病毒局部侵染蔓陀罗、苋色黎、昆诺阿黎、普通烟、心叶烟、枯斑三生烟,系统侵染辣椒、矮牵牛、千日红,不侵染黄瓜、番茄、蕃杏、甜瓜、苦瓜、生菜、白菜、甘蓝、蚕豆。对16个甜椒品种抗病鉴定,发现供试品种均感病。 三、以PEG6000沉淀病毒和差速离心提纯辣椒轻斑驳病毒,提纯病毒负染后电镜观察到大量杆状病毒粒体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得,辣椒轻斑驳病毒蛋白亚基分子量为20KDa。精提纯病毒五次免疫兔子,DAS-ELISA测得所制备辣椒轻斑驳病毒多克隆抗体效价为32768。 四、用Trizol提取病叶总RNA,反转录为cDNA。通过3对特异性引物,分别扩增出病毒外壳蛋白基因、病毒移动蛋白基因和与病毒复制相关蛋白基因。PCR产物经纯化测序分析表明北京、保定两地辣椒轻斑驳病毒分离物核甘酸序列同源性99.7%,它们与日本AB000709最为接近。 五、血清学和黄瓜花叶病毒外壳蛋白核甘酸序列分析表明,宁夏和北京分离物都为亚组Ⅰ成员,北京分离物与IB亚组的美国分离物(AF127977)同源性最高,宁夏分离物与IB亚组的美国分离物(AJ271416)同源性最高。 六、血清学结果表明,甜椒种子带毒率很高,但未发现辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病毒传毒。 本试验从生物学、血清学、病毒粒子形态、分子生物学4个方面,鉴定了在保定和北京发生日益严重的甜椒病毒为辣椒轻斑驳病毒。制备了高效价的抗血清,为今后用血清学检测辣椒轻斑驳病毒奠定基础。辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因序列的测定,为今后抗病毒转基因工程奠定基础。