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脂肪细胞的数量直接决定了机体脂肪含量。在体外,脂肪细胞的生长发育过程包括前体脂肪细胞增殖,起始分化和终末分化等过程。肉用动物体内脂肪的沉积直接影响胴体品质和肉质风味。Hhip(Hedgehog interacting protein)属于Hedgehog(Hh)信号通路,它通常与膜受体Patched1竞争性结合Hh配体,从而抑制Hh通路的传导。已有多项研究表明,Hh信号通路可以调控脂质代谢,然而,作为Hh信号传导的重要信号分子,Hhip对脂质沉积的生物学功能仍未报道。为了验证Hhip的生物学功能,本研究利用real-time qPCR和Western blot技术检测了Hhip及Hh通路成员在关中黑猪皮下脂肪组织中的表达模式以及3T3-L1细胞分化中的表达模式;通过流式细胞术,EdU染色,CCK8检测等技术检测了Hhip对前体脂肪细胞增殖的影响;通过油红O染色、Bodipy染色等技术探究了Hhip对前体脂肪细胞分化的作用及机制。获得的主要结果如下: 1.Hhip mRNA在3日龄和180日龄关中黑猪脂肪组织中表达呈现差异;在前体脂肪细胞体外分化前中期,Hhip mRNA和蛋白水平表达逐渐增加,在分化第6天达到最高峰,然后逐渐下降。 2.重组蛋白Hhip(rHhip)处理猪皮下前体脂肪细胞,显著下调细胞周期相关基因Cyclin B,Cyclin D,Cyclin E mRNA水平以及Cyclin D和Cyclin E蛋白水平,并显著下调处于S期细胞比例,说明Hhip可以抑制前体脂肪细胞增殖。 3.重组蛋白Hhip(rHhip)处理显著促进前体脂肪细胞分化和脂质积累,表现为PPARγ和Glut4表达水平升高,Gli家族表达水平下降。 4.前体脂肪细胞分化过程中加入Hh激活剂Purmorphamine(PM)可以削弱Hhip对前体脂肪细胞分化的促进作用,同时逆转Hhip对Gli的抑制作用,说明Hhip通过抑制经典Hh-Gli通路促进前体脂肪细胞分化。 综上,Hhip mRNA水平在猪脂肪组织发育过程中下调。Hhip显著抑制前体脂肪细胞增殖。此外,Hhip通过靶向经典Hh-Gli信号通路促进前体脂肪细胞分化。这些发现表明了Hhip在前体脂肪细胞增殖和分化中的重要作用,并改善了Hh信号通路调节脂肪形成的网络,为改善胴体品质和肉质风味提供了新的证据和思路。