G蛋白偶联受体是目前最成功的药物作用靶点家族,其通过经典G蛋白信号通路和非经典GRK和β-arrestin信号通路调节细胞内信号,从而参与体内调控并介导一系列生理病理过程。胆汁酸受体TGR5作为治疗糖尿病、肥胖症、炎症、癌症等疾病的靶点,为TGR5激动剂和拮抗剂的发展提供了动力。TGR5激活后可以导致胞内cAMP的含量增加,可以起到降低血糖、抗炎和促进能量代谢的作用,然而TGR5的β-arrestin信号通路在疾病调控中的作用还需深入研究。本论文的第一部分通过构建LgBit/SmBit片段与TGR5和β-arrestin1/2融合表达质粒建立检测TGR5与β-arrestin相互作用的模型。首先采用cAMP实验验证TGR5-LgBit/SmBit融合质粒的功能,然后将TGR5-LgBit/SmBit与β-arrestin1/2-LgBit/SmBit两两组合转至HEK293细胞中,利用NanoBit实验进行检测,根据信号稳定和信号窗口大小,确立TGR5与β-arrestin相互作用的模型,即TGR5-LgBit与SmBit-β-arrestin1/2的组合。此外,再构建β2AR-LgBit、A2ARLgBit融合质粒,与SmBit-β-arrestin1/2共转至HEK293细胞,再利用NanoBit实验进行检测,检测结果与文献报道相符合。这表明该模型不仅适用与TGR5与β-arrestin相互作用的检测,也可用于其他GPCR与β-arrestin相互作用的检测。说明该模型准确、可靠,为配体的筛选提供新的验证方法,并可运用于今后的GPCR信号转导通路及偏向性激动剂的研究中,为更进一步阐明GPCR信号转导研究奠定了一定的方法学基础。本论文的第二部分为利用cAMP实验构建TGR5小分子激动剂的筛选模型,从结构改造的化合物中,我们得到了一些激动活性较好并值得进一步研究的化合物。为TGR5激动剂成为治疗糖尿病候选药物提供基础。