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大麦是世界第四大禾谷类作物,因其抗逆性强、适应性广而被广泛种植,其基因组较小,是麦类遗传研究的模式植物之一。目前大麦的转基因研究较少,有严重的基因型依赖性,而且中国还没有安全型转基因大麦植株的报道,因此建立商业化推广大麦品种的无筛选标记遗传转化体系,对于大麦的遗传改良和基因功能研究具有重要意义。本研究建立了商业化大麦品种Vlamingh的农杆菌转化体系,成功将双T-DNA载体p WMB123转入大麦中,获得了稳定遗传的转基因植株。并且通过后代遗传分离成功获得了无筛选标记转基因植株。同时利用CRISPR/Cas9系统对大麦皮裸基因Hv Nud及其在小麦中的同源基因Ta Nud进行了定点突变,获得了基因编辑突变体。主要研究结果如下:1、对大麦品种Vlamingh的培养基成分及培养步骤进行了摸索优化:发现在愈伤组织分化阶段,培养基中添加1.0 mg/L KT、0.5 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA明显促进愈伤组织分化;在转基因植株生根阶段,发现采用添加1.0 mg/L的IBA的SM1培养基(无其他生长素)的生根效果最佳;培养基中添加2.5 mg/L Cu SO4显著降低了大麦转基因植株白化现象。2、构建了同时含有目的基因GUS和标记基因Bar的双T-DNA载体,并成功转化了优良大麦品种Vlamingh,在T0代获得了14株转基因植株,转化效率10.14%。PCR、Bar试纸条、GUS染色等检测证实,T0代植株中均含有Bar基因,其中的10株中含有GUS基因。选取4个同时含有Bar基因和GUS基因的转基因植株,对其自交后代进行检测,在BL-8株系中筛选到2株Bar—GUS+的转基因植株,无筛选标记效率为6.9%。3、通过BLAST搜索发现了小麦中Nud基因的三个同源等位基因(Traes CS7A02G376300,Traes CS7B02G277800和Traes CS7D02G372700)。在小麦和大麦Nud基因序列一致性区域设计了sg RNA,构建了CRISPR/Cas9载体,并将其分别导入大麦Vlamingh和小麦Fielder。获得了10株大麦转基因植株,其中2株发生了编辑。获得了119株小麦转基因植株,其中61株发生了编辑,总共有5种编辑类型。并且在T1代成功获得了5种编辑类型的纯合体。此外,我们在大麦和小麦中证实T0代转基因植株是嵌合体即不同的分蘖是不同的转基因事件。