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目的:本研究使用小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)沉默cofilin-1基因的表达,并观察黄芩苷和cofilin-1沉默对人皮肤鳞癌A431细胞增殖生长和迁移能力的影响,以明确cofilin-1在皮肤鳞癌发生过程中的作用,并阐明黄芩苷抗皮肤肿瘤的作用机制。方法:1、细胞培养:用10%胎牛血清的高糖培养基DMEM在37℃、5%CO2的培养箱中培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞。2、药物配制:黄芩苷中加入二甲基亚砜(DMSO),配制成浓度为40mg/ml-20℃的冰箱冷藏备用,实验时以培养基稀释为50μg/ml。3、siRNA干扰:针对cofilin-1mRNA的序列设计合成了cofilin-1特异性的siRNA,并转染人皮肤鳞癌A431细胞,运用实时定量PCR(Real-time PCR)法来检测cofilin-1基因沉默的效果。4、检测细胞增殖活性:用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK8)法检测A431细胞的增殖的变化情况。5、检测细胞迁移能力:用细胞划痕试验检测A431细胞的迁移能力。结果:1.实时定量PCR结果表明,每个转染组细胞中的cofilin-1mRNA的相对的表达量都低于空白对照组,差异均有统计学的意义(P<0.05),表明cofilin-1siRNA明显抑制了cofilin-1表达,在后继实验中,我们选择沉默效果最好的siRNA片段进行细胞实验,同时western blot检测证实了CFL1-497-siRNA可在蛋白水平上有效抑制A431细胞中的cofilin-1的表达。2.和空白对照组比较, cofilin-1siRNA转染于细胞24h、48h、72h之后,均出现细胞增殖活性明显降低;单纯加入黄芩苷孵育后,A431细胞增殖活性同样出现不同程度下降;而当把黄芩苷合并cofilin-1siRNA干扰时, A431细胞增殖活性的抑制作用最显著,这表明沉默cofilin-1基因可显著增强黄芩苷的作用;3.细胞划痕实验结果显示,划痕后继续培养24h,各组间细胞间隙均有一定程度愈合,其中黄芩苷组及cofilin-1siRNA组与对照组相比,划痕愈合程度明显下降;而黄芩苷合并cofilin-1-siRNA干预时,细胞的迁移愈合能力则进一步下降,各组间的差异有统计学意义(P<0.05)结论:抑制cofilin-1表达及单独黄芩苷处理可明显降低皮肤鳞癌细胞的活性与迁移能力,而黄芩苷合并cofilin-1-siRNA则显著增强黄芩苷的作用效能。因此,cofilin-1基因为成为增强治疗皮肤肿瘤及药物开发的靶点。