【摘 要】
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基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)作为一种多功能蛋白,可以特异抑制金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)的水解活性,还可
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基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)作为一种多功能蛋白,可以特异抑制金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)的水解活性,还可通过信号转导途径参与肿瘤细胞的增殖、凋亡及肿瘤血管发生,从而来解释TIMP-1基因和MMPs基因在乳腺癌细胞中含量都升高这一矛盾现象。本研究以人乳腺癌细胞(MCF-7)和正常乳腺上皮细胞(HBL-100)为研究载体,探讨TIMP-1基因对人乳腺细胞影响。本试验首先提取人乳腺癌细胞(MCF-7)的总RNA,通过RT-PCR方法扩增TIMP-1全长基因,通过设计引物在TIMP-1基因前加入了KOZAK序列,构建TIMP-1基因的真核表达载体(pcDNA3.1-TIMP-1-k和pcDNA3.1-TIMP-1),经PCR和酶切鉴定正确后,送上海生物工程技术服务有限公司测序,测序结果与BLAST上发表的TIMP-1基因序列号比对,其正确率为100%,表明成功构建了TIMP-1基因全长真核表达载体;而TIMP-1基因的RNA干扰质粒由上海吉玛公司合成。将以上构建TIMP-1基因真核表达载体和RNA干扰载体分别转染入MCF-7和HBL-100,用Real Time PCR方法和Western blot方法分别检测TIMP-1基因在乳腺细胞中表达,同时再用MTT方法检测TIMP-1基因过表达和RNA干扰后对人乳腺细胞增殖的影响。KOZAK序列可以提高TIMP-1基因在人乳腺细胞中的表达;TIMP-1基因过表达后可以提高该基因在人乳腺细胞中的表达,能够促进人乳腺细胞增殖;而TIMP-1基因干扰后可以降低该基因在人乳腺细胞中的的表达,并且能够抑制人乳腺细胞增殖。表明TIMP-1基因为一种促进细胞增殖的基因。
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