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实验目的从细胞水平探讨附子理中丸配伍解毒的机理。主要从心肌细胞膜损伤及离子通道mRNA表达两方面观察其主要毒性成分乌头类生物碱的毒性作用及甘草、人参中成份对该毒性作用的影响。实验方法采用差速贴壁法培养原代乳鼠心肌细胞，镜下观察心肌细胞搏动次数，使用α-actin免疫组化法鉴定培养心肌细胞的纯度。将细胞传至培养板，用第二代心肌细胞进行实验。药物刺激结束后，进行指标检测。我们采用MTT分析法来检测乌头碱对细胞存活率的影响。然后用比色法测定培养液中LDH活性。分组采用正交设计方法，找出最适的实验条件。并进一步观察乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的心肌毒性作用及甘草、人参中主要成分对其毒性作用的影响。采用RT-PCR方法观察SCN5A.Kv4.3及Cav1.2离子通道基因mRNA的表达，半定量分析甘草苷、人参皂苷Rg1、Rb1和Re与乌头碱配伍对上述离子通道基因表达的影响。实验结果(1)显微镜下可见心肌细胞的节律性搏动，α-actin免疫组化法鉴定符合心肌细胞特征，而且纯度达90％以上；(2)5、20、40、80、160、320、640、1280μmol／L各剂量组乌头碱在4、8、12及24h时，对心肌细胞存活率未表现出明显的影响；(3)乌头碱在0.1mmol／L-0.3mmol／L的浓度范围内，LDH的释放量随乌头碱浓度的增加而增加，量效关系明显。同时观察到次乌头碱、中乌头碱都可导致LDH释放增加，其中以中乌头碱为最甚。高、中、低三个浓度的人参皂苷Rg1、Rb1、Re及甘草酸、甘草苷可不同程度的拮抗三种乌头碱所导致的LDH释放增加。而甘草次酸无论是单独对心肌作用，或是与乌头碱伍用时，都表现出了较强的毒性作用。(4)乌头碱组SCN5A及Cav1.2基因的mRNA水平较对照组升高(P＜0.01)，而Kv4.3基因的mRNA水平较对照组降低(P＜0.01)。甘草苷、人参皂苷Rg1、Rb1和Re对乌头碱的这些作用有不同程度的拮抗。结论(1)培养的原代心肌细胞质量较好，可用于实验研究；(2)乌头碱在我们所测剂量范围内，对心肌无明显杀伤作用；(3)乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的心肌毒性包含膜损伤机制。人参皂苷Rg1、Rb1、Re及甘草酸、甘草苷可减轻乌头碱所致的膜损伤。甘草次酸可以造成心肌细胞的损伤，与乌头碱配伍使用，可共同增加心肌细胞LDH的释放；(4)甘草苷和人参皂苷Rg1、Rb1和Re与乌头碱配伍具有减毒增效的作用，这可能与甘草苷和人参皂苷Rg1、Rb1和Re改善了乌头碱对心肌细胞钾、钠、钙离子通道编码基因的异常表达有关。