目的:胃癌全球发病率在肿瘤中位列第4位，死亡率位列第2位，严重威胁人类的生命健康。从患病人数来看，我国胃癌患者数占全球发病总数的47％左右。目前手术仍是治疗胃癌的主要手段，结合术前或术后的辅助治疗，但进展期胃癌预后仍然较差，联合化疗的中位总生存一直停滞在10～11个月。因此胃癌的内科治疗仍十分棘手，现行治疗方案远不能让人满意。　　 表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)是1种受体酪氨酸激酶，EGFR基因的表达异常与多种肿瘤的发生有关，这种表达异常可导致细胞增殖，迁移，侵袭，转移，血管生成和抑制细胞凋亡。最近的研究报道，EGFR在正常胃黏膜中无表达或低表达，在胃癌组织中高表达，EGFR与胃癌的发生、发展密切相关。近年来随着对胃癌分子生物学研究的不断深入，分子靶向治疗应运而生。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitor，EGFR-TKI)的研究非常活跃。新一代EGFR-TKI盐酸埃克替尼(icotinibhydrochloride，商品名CONMANATM，克美纳TM)是中国首个自主研制的小分子靶向新药，并已获得国际认可。研究数据表明其在体外可抑制多种肿瘤细胞生长，如A431细胞株、人肺腺癌A549细胞株、舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株等。本实验以人胃癌SNU-1细胞为研究对象，探讨盐酸埃克替尼对细胞的增殖抑制的作用，并检测其下游信号通路，初步探讨其内在作用机制，为胃癌的靶向治疗提供新的思路。　　 方法:　　 1.细胞培育:常规复苏冻存的人胃癌SNU-1细胞，接种于100ml培养瓶中，在含10％胎牛血清，100U/ml的青霉素及链霉素的RPMI1640培养基，37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养。于倒置显微镜下观察细胞形态。　　 2.应用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-zyl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazoliuzolium，innersalt]比色法检测盐酸埃克替尼对人胃癌SNU-1细胞的增殖情况，绘制细胞生长抑制率曲线。　　 3.采用流式细胞术(Flowcytometry，FCM)检测盐酸埃克替尼对人胃癌SNU-1细胞细胞周期和凋亡的影响:将浓度为2.0×105个/ml的细胞悬液接种于100ml培养瓶中，培养24h后，实验组加入不同浓度(0、5、10、20、40、80μmol/L)的盐酸埃克替尼，对照组加入等量的培养液。继续培养48h后收集细胞，70％的冷乙醇固定，PI(50μg/ml)0.5ml避光染色后，置流式细胞仪（美国BeckmanCoulter公司生产）分析。　　 4.运用Westernblot法检测EGFR下游信号通路中相关蛋白质磷酸化Akt、细胞周期蛋白CyclinD1的表达情况。　　 5.所有实验数据均采用SPSS13.0软件进行统计分析，实验结果以(x)±s表示，多组比较时，方差齐者，采用单因素的方差分析，组间多重比较用SNK法。P＜0.05表示有显著性差异。　　 结果:　　 1.MTS法检测细胞增殖活性:同一时间点不同浓度(5、10、20、40、80μmol/L)的盐酸埃克替尼分别作用于人胃癌SNU-1细胞株后，细胞增殖受到明显抑制，随着浓度的增大，吸光度值明显减小，增殖抑制率明显提高，各浓度间抑制率差异显著(P＜0.05);同一浓度盐酸埃克替尼在不同时间点(24h、48h、72h)对人胃癌SNU-1细胞的抑制作用，随时间延长而增强(P＜0.05)。总之，盐酸埃克替尼对人胃癌SNU-1细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性。　　 2.流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和周期的分布情况:经FCM检测发现，不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）盐酸埃克替尼作用48h后，细胞的凋亡率分别为:（1.9004±0.361）％，(8.467±0.961)％，(14.267±3.702)％,(20.813±3.260)％,(26.533±3.102)％,(32.200±4.900)％，均显著高于对照组，各组间两两比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。细胞分布于G0/G1期的比率分别为:(11.667±2.173)％，(20.200±2.955)％,(28.467±5.380)％,(37.567±4.219)％,(46.000±4.321)％，(56.367±6.526)％;细胞分布于S期的比率分别为:(57.467±7.358)％,(48.900±4.590)％,(40.267±3.201)％,(31.700±2.052)％,(23.200±5.112)％，(14.567±2.581)％;细胞分布于G2/M期的比率分别为:(23.067±3.553)％,(21.767±2.669)％,(23.567±3.478)％,(14.167±2.793)％，(17.900±1.609)％，(10.833±1.550)％。各实验组较对照组均出现G0/G1期细胞比率增高与S期细胞比率下降，差异有显著性意义(P＜0.05)，而G2/M期比较差异无统计学意义（P＞0.05）。　　 3Westernblot法检测结果:与空白对照组相比，盐酸埃克替尼能明显下调p-Akt、CyclinD1蛋白的表达。　　 结论:　　 1.盐酸埃克替尼能抑制人胃癌SNU-1细胞株的增殖，其抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性。　　 2.盐酸埃克替尼能改变人胃癌SNU-1细胞株的细胞周期分布，有明显的G0/G1期阻滞作用，S期细胞比例减少，并诱导其凋亡。　　 3.盐酸埃克替尼可能是通过抑制人胃癌SNU-1细胞的EGFR/PI3K/Akt信号通路中相关蛋白p-Akt、CyclinD1的表达，在体外显著抑制细胞的增殖，并促进细胞的凋亡。　　 4.EGFR/PI3K/Akt信号通路可能参与了胃癌的发病机制，盐酸埃克替尼有可能成为胃癌靶向治疗的新型药物。