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心肌细胞缺氧过程中始终伴随着能量代谢的变化,包括代谢底物利用障碍、产能结构及耗能结构的变化。缺氧环境下能量代谢障碍可能是缺氧心肌细胞损伤的重要机制,耗能增加、能量贮存减少、代谢产物的大量堆积都会加重缺氧心肌细胞的损伤,因此寻求缺氧环境下能够促进细胞能量代谢的药物或手段已成为医学界的关注问题。红景天苷(Salidroside,SAL)为植物红景天的有效萃取物之一,其药性甘、苦、平,具有益气活血,通脉平喘等药效。常被用于治疗气虚血瘀,胸痹心痛,倦怠气喘及“腊毒”(高原缺氧反应)等病症。红景天苷还具有多种生理及药理活性,具有抗缺血、抗缺氧、拮抗Ca2+、清除氧自由基、抗衰老等多种作用。近年来,人们逐渐认识到红景天苷在心血管疾病中的重要作用。大量研究证实红景天苷可以改善不同状态下小鼠的能量代谢;对心肌缺血-再灌注、缺氧、缺糖的心肌具有保护作用。红景天苷及其临床制剂已广泛应用于临床,尤其在心血管疾病方面,如冠心病、心力衰竭、高血压、心肌病、心律失常等,但其具体的影响途径至今仍不明确。为进一步探讨红景天苷对心肌的影响,本实验从细胞水平观察红景天苷对缺氧心肌细胞的影响,从能量、缺氧学角度研究红景天苷对其代谢相关酶活性和相关蛋白表达的影响,为探讨中医药防治冠心病等缺氧、缺血性疾病提供参考。目的:1观察不同浓度红景天苷对缺氧心肌细胞上清液中LDH的影响;2观察红景天苷对缺氧心肌细胞内SDH、CPT-1的影响;3观察红景天苷对缺氧心肌细胞内CaM表达的影响;4探讨红景天苷改善缺氧心肌细胞能量代谢的可能途径;方法:1采用新生1-3d的SD乳鼠,分离心肌细胞进行体外原代培养,建立心肌细胞缺氧损伤模型。根据以往实验研究确立心肌细胞缺氧时间及药物浓度,依照实验需求将实验分为正常对照组、缺氧损伤模型组、红景天苷低、中、高剂量(10,50,100mg/L)干预组2心肌细胞培养成功、并建立缺氧模型后,采用比色法测定各组心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)的活力3采用ELISA试剂盒检测各组细胞内肉碱脂酰转移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)的活力4采用Westren Blot方法测定各组心肌细胞内CaM的表达量结果:1 1.1缺氧导致培养液中LDH活性增高,缺氧组与正常组相比LDH明显升高,有显著性差异(P<0.01),小剂量SAL组与缺氧组相比,LDH活性降低但无统计学差异(P>0.05),中剂量、大剂量加药组缺氧损伤后LDH活性降低,较缺氧组相比有统计学差异(P<0.05、P<0.01)。1.2缺氧导致细胞内SDH活性降低,缺氧组与正常组相比SDH含量明显降低,有统计学差异(P<0.01),小剂量SAL组与缺氧组相比,SDH的升高不明显无统计学差异(P>0.05),中剂量、大剂量SAL干预后SDH活性升高,较缺氧组相比有统计学差异(P<0.05、P<0.01)。1.3.不同浓度SAL组相比LDH的降低与SDH的增高与其浓度具有剂量依赖性。2缺氧导致细胞内CPT-Ⅰ活性降低,缺氧组与正常组相比CPT-Ⅰ活性明显降低,具有显著性差异(P<0.05);小剂量、中剂量、大剂量SAL干预后CPT-Ⅰ活性增高,但较缺氧组相比无统计学差异(P>0.05)。3缺氧导致细胞内CaM的表达量下降,缺氧组与正常组相比CaM的表达降低,具有统计学差异(P<0.05);小剂量、中剂量、大剂量SAL干预后CaM的表达增强,较缺氧组相比具有统计学差异(P<0.05),不同浓度SAL组相比CaM的表达增强,具有剂量依赖性。结论:1红景天苷可以降低缺氧心肌细胞上清内LDH的活性2红景天苷可以提高缺氧心肌细胞内SDH的活性3红景天苷对缺氧心肌细胞内CPT-1活性的影响不显著4红景天苷可增加缺氧心肌细胞内CaM的表达5红景天苷改善缺氧心肌细胞能量代谢的途径与增加SDH的活性、上调GaM的表达具有相关性6红景天苷改善缺氧心肌细胞能量代谢的途径与CPT-1无相关性