本研究以药用植物文冠果的种胚为外植体,通过固体和液体悬浮培养技术,对影响文冠果体细胞胚胎发生的多种培养因子进行筛选,建立了稳定的文冠果体细胞胚胎发生的培养体系。并以文冠果体细胞胚胎发生的第一条途径为研究对象,从组织细胞学、钙离子的超微细胞化学定位、同工酶酶谱以及特异蛋白质等4个方面,对文冠果体细胞胚胎形态建成的机理进行研究,结果表明: 1、文冠果种胚可以通过以下两种途径形成体细胞胚胎: （1）、文冠果种胚在B₅+2,4-D 1mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6g·L^-1的培养基上诱导产生非胚性愈伤组织,在B₅+2,4-D 0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6g·L^-1的培养基上继续培养获得A类胚性愈伤组织,在B₅+6-BA 1mg·L^-1+NAA 0.25mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1的培养基中,产生球形胚→心形胚→有明显胚根的A类鱼雷胚,鱼雷胚在B₅+6-BA 0.5mg·L^-1+NAA 0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1的培养基中发育成A类子叶胚,最终形成再生植株。 （2）、文冠果种胚在B₅+2,4-D 1mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6g·L^-1的培养基上诱导产生非胚性愈伤组织,在B₅+6-BA 0.5mg·L^-1+NAA 0.5mg·L^-1+2,4-D 0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6g·L^-1的培养基上形成B类胚性愈伤组织,在B₅+6-BA 0.5mg·L^-1+NAA 0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1的培养基中发育成球形胚→心形胚→无明显胚根的B类鱼雷胚→无明显胚根、有两片子叶的B类子叶胚,在B₅+6-BA 0.5mg·L^-1+NAA 0.5mg·L^-1+蔗糖10g·L^-1的培养基中长出胚根和多片幼叶,发育成再生植株。 2、文冠果体细胞胚胎形态建成过程中Ca²⁺的时空分布动态研究表明,非胚性细胞中Ca²⁺沉淀少,集中分布在细胞壁和细胞间隙中;胚性细胞中Ca²⁺沉淀明显增加,集中分布在质膜、液泡膜、细胞质、细胞壁和细胞间隙中;鱼雷胚的胚根根尖最外层细胞的外细胞壁加厚的位置Ca²⁺沉淀明显增多,表明Ca²⁺作为一种信号分子参与细胞壁的加厚和建成,这是一个创新。 3、文冠果体细胞胚胎形态建成过程中POD、SOD、淀粉酶、酯酶、ATP酶等五种同工酶酶谱的研究表明,这五种同工酶的谱带都随体细胞胚胎的发育而增多,并找出了几个时期的特异谱带,可以作为文冠果体细胞胚胎发生发育的生化标记。其中对体胚形态建成过程中SOD同工酶酶谱的动态变化的研究是一个创新之处。 4、文冠果体细胞胚胎形态建成过程中蛋白质组分的双向电泳图谱表明:非胚性愈伤组织的蛋白质组分最少,表达量较小;胚性愈伤组织、球形胚、鱼雷胚、子叶胚、再生植株等时期均有新的蛋白质产生,23.0、27.1、23.15kD的蛋白质分别是胚性愈伤组织、鱼雷胚、再生植株时期所特有的蛋白质,25.1、26.2kD的蛋白质是子叶胚所特有的蛋白质,这是本论文的新发现。