目的：制备负载RPL8蛋白的DC疫苗,观察DC疫苗对小鼠乳腺癌的疗效,并探讨其抑制乳腺癌生长的作用机制。方法：1.根据Gene Bank提供的RPL8的mRNA序列设计引物,PCR扩增RPL8基因,与载体酶切、连接,构建pET28a(+)-RPL8重组质粒。2.构建好的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,接种到含Kan的LB培养液中,37℃震荡培养4h,加入IPTG至终浓度lmmol/l,30℃,80rpm,震荡摇6h,并取菌液进行SDS-PAGE和Western Blot。3.制备好的RPL8蛋白冲击DC,荧光显微镜下观察DC负载RPL8蛋白情况。4.负载RPL8蛋白的DC培养48h与尼龙毛柱子分离的小鼠脾脏T淋巴细胞按不同的比例混合,继续培养72h,分别以不同效靶比加入到4T1细胞中培养48h,酶标仪测定其0D值。5.将负载RPL8蛋白的DC疫苗注射入荷瘤小鼠体内,观察乳腺癌肿瘤体积变化及小鼠的生存时间与瘤体的组织病理变化。结果：1.经酶切及测序鉴定,重组质粒含有大约6124bp的片段,序列与gene bank一致,成功构建了携带RPL8基因的重组质粒。2.含有重组质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达约28KD的蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,获得目的蛋白。3.RPL8蛋白与DC混合培养后,经荧光显微镜观察,可见细胞内有荧光颗粒。4.负载RPL8蛋白的DC疫苗体外杀伤4T1乳腺癌细胞的细胞毒活性与未负载RPL8蛋白的DC及PBS组比较,差异有显著性(p<0.05)。5.负载RPL8蛋白的DC疫苗,注入荷瘤小鼠体内后,治疗组的小鼠生存期和小鼠的肿瘤体积变化较对照组有显著性差异(p<0.05)。结论：负载RPL8蛋白的DC疫苗对小鼠乳腺癌具有免疫治疗作用,为乳腺癌的免疫治疗提供理论依据。