论文部分内容阅读
本实验以柑橘采后主要病原菌—意大利青霉和指状青霉为供试菌种，选用78种中草药乙醇提取物对其进行抑菌活性筛选，并以柑橘采后常用化学杀菌剂—咪鲜胺、百可得为对照，研究中草药提取物抑菌效果。从供试中草药中筛选出有最佳抑菌活性的提取物—桂枝，进一步对其抑菌活性物质提取工艺、抑菌机理、抑菌谱和对新余蜜橘的生防效果进行研究。此外，在一定酸性条件下，研究了桂枝与常用食品添加剂复配物对意大利青霉和指状青霉的抑菌增效效果，以期在保持良好的抑菌效果前提下减少食品添加剂的用量。本研究对柑橘无公害保鲜杀菌剂的研发及农作物病害绿色防治有重要的意义。研究主要结果如下：1、采用牛津杯法及二倍稀释法对中草药乙醇提取液抑菌活性进行筛选，结果表明：桂枝抑菌活性最好，对意大利青霉和指状青霉的抑制圈大小分别为34.57±0.78mm和31.56±0.66mm；最小抑菌浓度(MIC)分别为3.13mg/mL和6.25mg/mL;最小杀菌浓度(MFC)分别为6.25mg/mL和12.5mg/mL，且优于1000倍的百可得稀释液对意大利青霉和指状青霉的17.03±0.21mm和16.07±0.21mm的抑菌效果，经邓肯差异显著性分析，它们间的差异达到极显著水平(p<0.01)。2、采用超声波辅助提取技术，结合单因素试验，以抑菌圈直径为指标，考察乙醇提取溶剂的浓度、料液比、浸提时间和浸提温度对桂枝抑制意大利青霉和指状青霉的活性影响，结果表明，采用浓度为95%的乙醇、提取时间2h、料液比1:10、提取温度40℃为桂枝的最佳抑菌活性物质提取工艺。另外采用生长速率法对猕猴桃灰霉菌等其它15种植物病原菌进行抑菌活性测定，结果表明桂枝提取液含有抑制等多种病原菌生长的活性成分，具有较广泛的抑菌谱。3、从对意大利青霉、指状青霉的孢子萌发率、菌体的细胞膜渗透性、菌体内容物（可溶性蛋白质、糖）和菌丝形态的影响这四个方面对桂枝的抑菌机理进行初步探讨，结果表明，桂枝提取液能有效地抑制两种病原菌的孢子萌发，增加菌体细胞膜的通透性，导致菌丝内含物质（糖、可溶性蛋白）的外渗，影响菌丝的生长发育，使菌丝呈现多种形态甚至畸形如顶端膨大、菌丝皱缩、断裂等，从而达到抑菌或杀菌的效果。4、以新余蜜橘为材料，采用损伤接种法，研究桂枝提取液对新余蜜橘的活体生物防治效果，结果表明桂枝提取液与柑橘青霉活体防治效果成正相关浓度依赖效应，随着提取液浓度的升高，其对柑橘青霉病的病斑扩展抑制作用增强，各处理组间呈显著差异。在提取液浓度为100mg/mL时，先接种混合菌悬浮液后使用桂枝提取液处理果实，对新余蜜橘青霉病的防治效果为41.18%；在此浓度下，先使用桂枝提取液处理果实后再接种混合菌悬浮液时，对新余蜜橘青、绿霉病的防治效果更好，可达44.31%，这表明病原菌接种和植物保鲜剂处理的先后顺序对柑橘青、绿霉病的防治效果有显著影响。5、在pH为3.3的酸性条件下，1g/mL桂枝提取液,1%山梨酸钾,1%苯甲酸钠,按体积1:1:1配成的复配组合，对意大利青霉和指状青霉的抑菌圈大小分别达44.40±0.44mm和41.83±0.15mm，而相同条件下，1g/mL桂枝提取液对意大利青霉和指状青霉的抑菌圈大小分别为40.87±0.30mm、39.83±0.25mm，1%苯甲酸钠为43.80±0.26mm、39.17±0.45mm，1%山梨酸钾为39.13±0.50mm、35.13±0.30mm，0.5%苯甲酸钠+0.5%山梨酸钾为44.27±0.42mm、40.53±0.12mm，0.5%苯甲酸钠+0.5g/mL桂枝为44.23±0.15mm、40.67±0.23mm，0.5%山梨酸钾+0.5g/mL桂枝为43.37±0.21mm、40.40±0.20mm，因此此复配组合0.33%苯甲酸钠+0.33%山梨酸钾+0.33g/mL桂枝对两种供试菌的抑制效果优于复配液中的单一组分及它们之间的两两复配组合，且此组合中各组成成分的含量最低，达到了在减少食品添加剂使用量的基础上，获得相当、甚至更好的复配协同功效。