亚洲棉及雷蒙德氏棉端粒DNA序列的发掘与分析

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端粒是真核生物染色体末端的结构,由端粒DNA序列与端粒相关蛋白组成,具有保护染色体末端结构,防止染色体末端融合、降解的作用。端粒DNA序列含有端粒简单重复序列(TR)和端粒相关序列(TAS)、TR序列具有高度的种间保守性,具有保护染色体末端的作用,TAS序列具有种属特异性和丰富的多态性,可以作为遗传标记,用于染色体的物理定位研究。端粒序列的研究对于人工染色体的构建、染色体的物理定位及基因组起源与进化的分析具有重要意义。本研究采用两种不同的方法,分别克隆了亚洲棉(G arboreum)和二倍体棉D组的端粒序列,并对其进行序列分析,然后对其在A组、AD组染色体上的信号分布情况做了比较分析。主要研究结果如下:1.亚洲棉(G. arboreum)端粒相关序列克隆的获得及分析。首次获得了1个亚洲棉端粒相关序列的克隆--TAS-1。采用FISH方法将TAS-1序列定位在亚洲棉有丝分裂中期染色体末端。分析TAS-1的序列,结果表明:该克隆富含A/T碱基,含量为66.6%;含有1个拷贝的TTTAGGG型重复单元、10个串联重复序列、1个未知单元的散布重复序列;具有种属特异性。2.TAS-1序列在亚洲棉(G. arboreum)、陆地棉(G. hirsutum)及海岛棉(Gbarbadense)上FISH信号分布情况的比较分析。FISH结果说明,该克隆在亚洲棉的每条染色体末端上具有较强的荧光信号点;在陆地棉(G. hirsutum)每条染色体末端具有较弱的荧光信号点,但在一对未知的同源染色体的一端具有1对较强的荧光信号点;在这三个棉种中,该序列在海岛棉(G. barbadense)每条染色体上荧光信号强度最弱。3.利用TRF法估测了二倍体亚洲棉(G. arboreum)基因组端粒的平均长度值介于10kb到20kb之间。4.二倍体棉D组端粒克隆的获得与分析。通过引物设计,PCR扩增与FISH验证获得了10个D组端粒克隆。分析这10个D组端粒克隆的序列发现,在D组染色体末端存在较多的拟南芥型端粒重复单元的变异体。5.初步比较分析了两类D组端粒克隆在陆地棉(G hirsutum)及亚洲棉(Garboreum)上的FISH信号分布情况。结果说明,含有TTTAGGG型串联重复的端粒克隆在A组、AD组中FISH信号分布差异不明显。含有TTTAGGG型间接重复的端粒克隆序列在A组、AD组染色体中的FISH信号分布有较大差异;其在染色体不同末端间的FISH信号分布也具有较大差异性。
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