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豆科植物和根瘤菌建立共生关系,形成新的植物器官根瘤,为植物提供可利用的氮源。豆科植物和根瘤菌之间的相互作用包括根瘤菌的侵染,根瘤原基的形成和固氮根瘤的形成,都受到宿主的严格调控。近几年来,从模式豆科植物百脉根和苜蓿中鉴定出一系列参与结瘤因子感知和信号传导的关键基因。其中,结瘤信号通路蛋白NSP1和NSP2是共生信号转导途径中关键的信号蛋白,都属于GRAS家族转录因子。为了研究这类转录因子在根瘤形成过程中的调控机制,本文在从百脉根中分离到与LjNSP2相互作用蛋白LjIPN2的基础上,开展了苜蓿中与LjIPN2同源物MtIPN2的功能及作用机制研究,具体研究结果如下: 1.用LjIPN2的核苷酸序列在http://www.medicagohapmap.org/网站中做BLAST比对分析,在苜蓿中发现两个同源基因,分别命名MtIPN2和MtILK。在NCBI(National Center for Biotechnology Information)网站用MtIPN2和MtILK的氨基酸序列做BLAST比对发现,它们同属于MYB-like转录因子家族,含有一个单个重复的MYB类结合DNA的结构域和一个预测的coiled-coil二聚化结构域。 2.对MtNSP2、MtIPN2和MtILK相应结构域进行截短,利用酵母双杂交结果表明,MtNSP2含有所有四个结构域(LHR1、VHIID、LHR2和SH2-like)的截短能与MtIPN2和MtILK的相互作用;而MtIPN2和MtILK的保守(结构域MYB和coiled-coil结构域)能够与MtNSP2相互作用。 3.BiFC结果,进一步验证了MtIPN2和MtILK与MtNSP2的相互作用,在植物细胞内,MtIPN2和MtILK能够与MtNSP2相互作用,但是不能与MtNSP2E232K相互作用。 4.mcBiFC结果,证明了在同一个植物细胞中MtNSP2与MtNSP1相互作用形成异源二聚体的同时,还能够和MtIPN2或MtILK相互作用,形成三元复合物;另外MtIPN2和MtILK能够同时与MtNSP2相互作用。 5.在苜蓿根中,MtIPN2和MtILK定位于细胞核中。 6.EMSA结果,在体外证明LjIPN2能够与LjNIN的启动子的-436到-406相结合,LjNSP1能够与LjNIN启动子的-500到-1相互结合。