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背景与目的：骨质疏松症(osteoporosis)是一种进行性全身性骨代谢性疾病,以骨量减少和骨组织微结构破坏为特征,导致骨质脆性增加和易于骨折。目前全世界约2亿人患有骨质疏松症,其发病率已跃居常见病、多发病的第7位。目前,用于治疗骨质疏松症的药物在一定程度上能减轻骨质疏松症患者的临床症状,提高骨密度,改善骨微结构,降低骨折风险,但大多数药物长期疗效不明确,缺乏安全性,长期用药费用昂贵,患者依从性差。课题组前期的研究发现,黄精的主要活性成分黄精多糖可以抑制骨质疏松症大鼠模型的骨吸收,改善骨质流失,起到防治骨质疏松症的作用,但其作用机制尚未明确。本实验基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄精多糖对体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨分化的促进作用及其可能的作用机制。方法：(1)小鼠骨髓间充质干细胞的培养,显微镜下观察细胞形态变化；(2)MTT法测定不同浓度黄精多糖对BMSCs细胞增殖的影响；(3)在成骨诱导培养液诱导下,五个实验组给予终浓度为5、10、25、50、100mg/L的黄精多糖进行干预,对照组加等量的无血清培养基,显微镜下观察细胞形态变化；(4)诱导14天后,PNPP法检测碱性磷酸酶活性；(5)诱导4周后,观察细胞发生矿化并进行茜素红染色,记录矿化结节数和面积分数；(6)诱导7、14、21天后,qRT-PCR法检测成骨相关基因COL I、ALP、Runx2、OCN mRNA表达；(7)诱导24、48、72h后,采用qRT-PCR方法检测β-catenin基因表达水平；采用Western Blot分别检测β-catenin在总蛋白、胞质蛋白和胞核蛋白中的表达水平；(8)以25mg/L黄精多糖处理BMSCs72h,通过免疫荧光检测β-catenin在细胞内的分布；(9)采用双荧光素酶报告基因检测系统检测下游β-catenin/TCF的转录活性。结果：(1)正常BMSCs呈长梭形,成纤维细胞样,成骨诱导后细胞体积变大,成短梭形；(2)MTT法检测细胞增殖,各组OD值的差异无统计学意义；(3)与对照组相比,不同浓度的黄精多糖以剂量依赖性的方式提高碱性磷酸酶活性(P<0.05),25mg/L浓度组最为显著；(4)矿化结节经茜素红染色呈红色,黄精多糖处理组形成的矿化结节数与矿化面积分数均显著高于对照组(P<0.05),但各处理组矿化结节数之间的差异不明显,矿化面积分数以剂量依赖性增高；(5)黄精多糖处理能明显提高成骨相关基因COL I、ALP、Runx2、OCN mRNA的表达水平(P<0.05)；(6)黄精多糖各浓度组β-catenin mRNA表达水平随诱导时间的延长而增高,与24h、48h相比,在72h表达量较高,且10、25、50mg/L浓度组显著高于对照组；(7)浓度在5-50mg/L的黄精多糖处理BMSCs能明显增加β-catenin的总蛋白量以及在细胞核内的蛋白水平,呈现剂量依赖性,在25mg/L达到高峰；β-catenin在细胞质中的蛋白水平在各浓度组之间无明显差异；(8)与对照组相比,25mg/L黄精多糖组胞质胞核中均出现了β-catenin的累积,特别是胞核内β-catenin积累更加明显；(9)黄精多糖处理组TOPFlash报告基因的荧光素酶活性显著增强,其中在25mg/L浓度组增加了3倍,作用最为显著；FOPFlash报告基因没有明显变化。结论：(1)黄精多糖可促进小鼠骨髓间充干细胞向成骨细胞分化,提示具有潜在的抗骨质疏松作用。(2)黄精多糖上调BMSCs β-catenin的表达和促进β-catenin核定位,增强β-catenin/TCF的转录活性。因此,黄精多糖通过激活Wnt/β-catenin信号传导通路促进体外诱导的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。