【摘 要】
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西瓜作为世界上重要的经济作物之一,在生长发育阶段易遭受各种病原菌的侵害从而影响经济产值。由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)引起的西瓜枯萎病是损害西瓜产量最主要的土传病害。为实现环境友好型生产,响应可持续发展战略,应将农药、抗性育种和嫁接等防治西瓜枯萎病的方法转变为利用生物菌剂防治。因此,本试验旨在分离出西瓜枯萎病菌,并筛选防治西瓜枯萎病的拮抗细菌,初步探究
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西瓜作为世界上重要的经济作物之一,在生长发育阶段易遭受各种病原菌的侵害从而影响经济产值。由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)引起的西瓜枯萎病是损害西瓜产量最主要的土传病害。为实现环境友好型生产,响应可持续发展战略,应将农药、抗性育种和嫁接等防治西瓜枯萎病的方法转变为利用生物菌剂防治。因此,本试验旨在分离出西瓜枯萎病菌,并筛选防治西瓜枯萎病的拮抗细菌,初步探究拮抗细菌的防治机理。主要研究内容如下:从发病西瓜植株根部分离出尖孢镰刀菌,通过平板拮抗试验筛选出对病原菌具有拮抗作用的菌株MM;由菌丝生长速率法测得,菌株MM对尖孢镰刀菌具有显著抑制效果,抑制率达65.46%,并使菌丝出现膨大、缢缩、断裂等畸形形状;菌株MM与9种病原真菌对峙结果表明,菌株MM具有抑菌广谱性;经形态学和分子生物学鉴定菌株MM为普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica);通过检测透明圈发现菌株MM具有多种水解酶活性,且菌株MM的发酵滤液对尖孢镰刀菌孢子萌发的抑制率达89.68%;对普城沙雷氏菌MM发酵培养基及培养条件进行优化,最佳培养基及条件为:葡萄糖为12.748g/L,牛肉膏为2.086 g/L,酵母粉为3.091 g/L,p H7.0,温度30℃,转速180 r/min,接种量3%,发酵时间72 h;通过测定发酵滤液的活性,可得普城沙雷氏菌MM对尖孢镰刀菌的EC50为216.7μl/m L;在菌丝抑制定量试验中,普城沙雷氏菌MM对尖孢镰刀菌抑制率达70.6%;通过平板对扣法检测出普城沙雷氏菌MM的挥发性物质具有非常好的抑菌效果,抑菌率达71.66%。同时,其代谢产物具有耐高温活性,对多种土传病害有抑菌效果,抑菌率为40.04%~76.78%;通过基因工程技术构建了带有GFP标签的菌株MM,利用激光共聚焦显微镜观察出普城沙雷氏菌MM可定殖于西瓜根系;普城沙雷氏菌MM可以合成IAA,促进种子和植株的生长,其产量为10.239 mg/L;种子发芽试验表明,普城沙雷氏菌MM发酵滤液对种子萌发有促进作用,当滤液稀释150倍时对种子的萌发促进作用最为显著;盆栽试验表明,普城沙雷氏菌MM对西瓜枯萎病有较好的防治作用,防效达74.55%;普城沙雷氏菌MM还使西瓜植株总叶绿素含量增加了1.36倍、根活力增强了57.06%;通过生防菌处理后防御酶活性测定和相关抗病基因表达的测定,证明基因POD、PAL、C4H、LOX和Cl PR3表达不同程度被上调,表明普城沙雷氏菌MM可激活西瓜植株根系多途径抗性基因的表达,并以此增强西瓜对尖孢镰刀菌的抗性。上述研究结果表明普城沙雷氏菌MM对西瓜枯萎病具有较好的防治效果,并对西瓜植株的生长发育具有显著促进作用,普城沙雷氏菌具有良好的生防潜力和开发前景。
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