辛硫磷在鲫鱼体内动态残留及对AChE诱导规律研究

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本论文选取鲫鱼为研究对象,建立了基质固相分散-高效液相色谱(MSPD-HPLC)检测鲫鱼肌肉中辛硫磷农药残留的方法,并对辛硫磷在鲫鱼体内动态残留规律进行了探讨,同时研究了不同时间不同浓度辛硫磷对鲫鱼脑、肝、肉三部分AChE的活性的诱导规律。主要研究结果如下:建立了MSPD-HPLC检测鲫鱼肌肉中辛硫磷农药残留的方法。通过优化样品处理条件,确定选取0.5 g肌肉样品与1.5 g弗罗里硅土和0.5 g无水硫酸钠研磨,并采用丙酮-正己烷溶液(40:60,V/V)为洗脱剂,洗脱用量为25 ml。优选最佳色谱条件为ODS色谱柱(4.6×250 mm,5μm),流动相:甲醇-水=50:50(V/V),流速:0.6mL/min,检测波长:270 nm,进样量为20μL。在上述条件下,辛硫磷浓度在0.01mg/L-10 mg/L范围内与响应信号呈良好的线性关系(R~2=0.9994),检出限达3.3μg/kg;相对标准偏差为1.1%-6.3%(n=7);添加3水平(0.05 mg/kg-1 mg/kg)的回收率为88%-112%。本分析方法操作简单,耗时少,精密度高,符合农残分析的要求。采用MSPD-HPLC考察中、高、低3个浓度下辛硫磷在鲫鱼体内动态残留规律。实验表明,鲫鱼暴露于辛硫磷水体中,在短时间内迅速吸收辛硫磷,并在6 h-48 h内达到吸收峰,并产生富集作用。即使在低浓度辛硫磷水体中也符合此规律。0.02 mg/L低剂量组中,鲫鱼肌肉中辛硫磷的残留量在6 h后随时间的延长而降低,到120 h后即不可检出;中高剂量组(辛硫磷浓度分别为0.1 mg/L和0.4 mg/L)鲫鱼肌肉中辛硫磷的残留量均随时间的延长而降低,96 h后呈持续缓慢减少状态。到144 h仍有存在微量残留。考察高、中、低暴露剂量下,辛硫磷对鲫鱼脑、肝、肌肉AChE的诱导规律。各剂量组下,辛硫磷对鲫鱼脑、肝、肉AChE的抑制率随时间延长而增加。抑制率达最大后,酶活随时间的延长而得到恢复。各暴露组脑AChE的抑制率在72h达到最大;肝AChE的抑制率在高剂量组时,到72 h可达到最大,中、低剂量组下到48 h即可达到最大;肉AChE的抑制率在48 h达到最大。到实验结束时中、高剂量组下,各部分仍有较高酶抑制率,而低剂量组均恢复到空白组水平。考察酶活恢复的情况,当鲫鱼由辛硫磷暴露水体中转移至清水中,其AChE酶活随时间延长呈现恢复趋势。到96 h时各部分酶活恢复到空白水平。探讨24 h-96 h辛硫磷在鲫鱼肌肉中残留情况与其对肌肉AChE活性影响之间的关系。中、高剂量暴露下,鲫鱼肌肉中辛硫磷的残留量和酶活抑制率变化规律相一致,均随时间的延长而增加,48 h达到峰值后,随时间的增加而呈现减小趋势。低剂量组暴露下,酶活的最大抑制作用较肌肉中辛硫磷的最大残留时间滞后,随后均随时间的延长而降低。本研究可用于鲫鱼体中辛硫磷残留的检测,同时也为其它淡水鱼体中有机磷农药的检测方法提供了参考。研究结果对于保障水产品的食用安全性具有积极作用,亦为淡水域环境保护和有机磷农药对水生动物的安全性研究提供了参考依据。
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