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本课题对灵芝属5 个种(赤芝G. lucidum, 松杉灵芝G. tsugae, G. oerstedii, G. subamboinense, 无柄灵芝G. resinaceum)共26 个菌株的液体发酵菌丝体三萜进行了研究。首先分析了用香草醛-高氯酸比色方法定量测定灵芝总三萜的最优条件,确定为样品甲醇溶液在70℃水浴挥干后,与0.1mL 5%香草醛-冰醋酸,1mL 高氯酸在60℃水浴条件下反应15 分钟,用3.9mL 的冰醋酸终止反应,547nm 处进行光吸收值的测定。其次,用MTT 法对乙醇提取的粗三萜(GLF)及其总三萜酸成分(GLT)和非酸性成分(GLX)的体外抑瘤效果进行检测分析。结果显示GLF 对人急性早幼粒细胞白血病HL-60 细胞及乳腺癌MCF-7 细胞均有强烈的抑制作用,抑制率分别达到65.4+3.6% (HL-60, 150μg/mL, 72h)和97.8+7.4% (MCF-7, 400μg/mL, 72h);而GLT在相同浓度的抑制率仅为16.4+4.8%和33.3+10.1%;GLX 的体外抑瘤效果则强于GLF, 抑制率分别为82.5+8.9%和98.0+7.9%。形态观察和Annexin V 标记后流式细胞仪分析显示GLF 和GLX 在100μg/mL 时都能诱导HL-60 细胞发生凋亡,而GLT则无此活性。据此,确定将乙醇提取的粗三萜,而非其精制品作为研究的样品。运用上述总三萜香草醛定量方法和MTT 体外抑瘤效果测定方法,我们对灵芝属内5 个不同种共26 个菌株液体发酵菌丝体三萜提取物的总三萜含量和体外抑瘤活性进行分析。结果发现总三萜含量从8.20±0.44%到15.85±0.07%不等,含量最高的是T3(15.85±0.07%)。26 个菌株的三萜提取物对HL-60 和MCF-7 分别在50μg/mL 到250μg/mL 及400μg/mL 到600μg/mL 范围内具有显著体外抑制作用。其中效果最强的菌株是赤芝种(G. lucidum)的L5 菌株,125μg/mL 时对HL-60 细胞的抑制率可高达91.4±0.9% (72h)。抑瘤率与菌株密切相关,但与其总三萜含量并不存在紧密的相关性。Annexin V 标记实验及核DNA 染色观察实验均显示赤芝G. lucidum 菌株L2, L3, L5, L7, G. oerstedii 菌株O2, 无柄灵芝G. resinaceum 菌株R2, G. subamboinense 菌株S2, 松杉灵芝G. tsugae 菌株T3 中的三萜提取物能诱导HL-60 产生凋亡,而非坏死。对HL-60 的抑制作用还与阻滞细胞周期有关。赤芝菌株L5 的三萜提取物在125μg/mL作用HL-60细胞48小时后,G0/G1期细胞比例比对照组增加15.9%, 而S 期细胞比例则下降了8.4%,G2/M 期细胞数减少7.6%。本研究为灵芝资源的开发及生产应用提供了依据和理论基础。