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目的本研究观察蓝光诱导后人视网膜色素上皮(Retinal Pigment Epithelium,RPE)细胞分泌的外泌体(exosomes)与NLRP3炎性体的相关性,检测外泌体作用后RPE细胞中NLRP3表达水平的变化,进而探讨光氧化损伤的RPE细胞分泌的外泌体在年龄相关性黄斑变性发病中的生物学作用,为将外泌体引入AMD的诊断、治疗及预后提供客观依据。方法1.蓝光诱导RPE细胞模型的建立及有效性评价培养ARPE-19细胞系,分为2组,一组建立蓝光诱导模型,将RPE细胞置于蓝光灯管下照射6h,另一组为正常对照,在正常细胞培养条件下培养,MTT法检测两组细胞的增殖活力。2.外泌体的提取鉴定及NLRP3水平测定应用分级低温超速离心的方法获得外泌体,透射电镜观察外泌体形态,Western Blot(蛋白免疫印迹)检测外泌体表面特异标志蛋白CD63并且对比实验组和对照组外泌体中NLRP3炎性体相关的蛋白IL-1β、IL-18、caspase-1水平。3.蓝光诱导的RPE细胞的外泌体对正常RPE细胞的影响和作用将实验组和对照组的外泌体分别作用于正常RPE细胞,MTT法对比作用后细胞增殖活力,Western Blot检测对比两组RPE细胞中NLRP3炎性体相关的蛋白IL-1β、IL-18、caspase-1水平,细胞免疫荧光检测验证两组RPE细胞内IL-1β、IL-18、caspase-1的水平的差异,rt-PCR检测两组RPE细胞中NLRP3 mRNA的表达水平。结果1.成功构建蓝光诱导的RPE细胞光氧化损伤模型,损伤后的RPE细胞肿胀,胞体失去多角形态,胞体变长,且与对照组相比,实验组RPE细胞的增殖活力明显减弱(P<0.05)。2.应用低温超速分级离心法分离获得外泌体,电镜观察符合其形态特征,Western Blot检测到外泌体表面标志物CD63;实验组外泌体中NLRP3相关的蛋白IL-1β、IL-18和caspase-1水平均明显高于对照组(P<0.05)。3.将蓝光诱导RPE细胞分泌的外泌体作用于正常RPE细胞后,RPE细胞的增殖活力明显减弱(P<0.05),且RPE细胞中NLRP3相关的蛋白IL-1β、IL-18和caspase-1分别高于对照组RPE细胞(P<0.05);细胞免疫荧光结果显示:实验组RPE细胞中IL-1β、IL-18、caspase-1的表达水平均明显高于对照组(P<0.05);rt-PCR结果显示实验组和对照组RPE细胞的NLRP3 mRNA相对表达量分别为(1.0±0.069)和(0.2±0.01),差异有显著性(P<0.05)。结论1.蓝光诱导的RPE细胞受到光氧化损伤,其分泌的外泌体中NLRP3炎性体相关的细胞因子IL-1β、IL-18和caspase-1表达上调;2.将高表达NLRP3炎性体相关蛋白的外泌体作用于正常RPE细胞后,RPE细胞中NLRP3炎性体相关的细胞因子IL-1β、IL-18和caspase-1表达上调,RPE细胞内NLRP3 mRNA表达上调。