家蚕(Bombyx mori)是一类重要的经济昆虫,目前作为生物反应器表达了多种外源蛋白,特别是其丝腺能够产生大量的丝蛋白,而成为研究的热点。但还存在许多不足,如外源基因的有效导入、整合、表达及转基因个体遗传稳定性等问题,仍需进一步深入研究。首先,本研究构建了基于转座子piggyBac的表达载体和辅助质粒。将家蚕细胞质肌动蛋白基因BmA3(cytoplasmic actinBmA3)启动子(不含信号肽序列)与转座子piggyBac的转座酶编码区融合构建成辅助质粒(pARTR1.2);将BmA3启动子(含信号肽序列和部分编码区)与绿色荧光蛋白基因(gfp)融合,插入到人工合成的转座子piggyBac两反向末端序列间,进而构建成基于转座子piggyBac的转基因载体(pZAGFP),在此载体中设计了一个多克隆位点区,便于外源基因的插入。其次,从家蚕(Bombyx mori)品种菁松×皓月后部丝腺中提取总RNA,用RT-PCR扩增技术克隆到家蚕丝心蛋白轻链cDNA,序列分析表明,该片段全长为798个碱基。比较4种不同品种来源的家蚕丝心蛋白轻链基因外显子区域序列,同源性在98.0%-99.4%之间,推测的氨基酸同源性在98.0%-99.6%之间,四个品种间发生的变异比较一致地集中在不同位置的8个碱基上。提取家蚕品种菁松×皓月后部丝腺总DNA,利用PCR扩增技术获得家蚕丝心蛋白轻链基因调控片段和终止子片段,长度分别约为1.2 kb和0.45kb,分别与J-139 L链基因相应区域进行比对,同源性高达98.8%和99%。结果表明,启动子片段包含一些典型的调控元件和多个可能参与