犬瘟热病毒(Caninedistempervirus,CDV)在分类上属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)、麻疹病毒属(Morbillivirus)，是引起犬科、鼬科及一部分浣熊科或其它食肉目动物犬瘟热(Caninedistemper,CD)的一种单链RNA病毒。CDV与犬细小病毒(CanineParvovirus,CPV)、水貂肠炎病毒(Minkenteritisvirus，MEV)常在宠物犬和毛皮动物上发生混合感染，在已免疫群体中症状往往不典型，难以从临床症状上做出准确的诊断。CDV的主要抗原蛋白之一血凝素蛋白(H)，在整个病毒基因组中的变异率是最高的，其基因常作为CDV的分型依据，并且蛋白糖基化可影响病毒的抗原性，因此进行H基因的测序分析，对于犬瘟热的流行病学监测和抗原性分析具有重要的意义。但是CDV作为具有囊膜的RNA病毒，对于光热等环境因素敏感，易被灭活，难以用传统的细胞系进行分离培养，限制了对CDV在感染机制、疫苗、治疗性药物等方面的深入研究。本文主要从以下三方面开展了相关研究:　　 试验一犬瘟热病毒和细小病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用　　 本研究根据CDV核蛋白(N)基因和CPV、MEV结构蛋白VP2基因的相对保守区设计了两对特异性引物，经试验条件的优化，建立了同时检测CDV和CPV/MEV的双重PCR方法。通过检测36份临床样品，对双重PCR方法和胶体金试纸条方法进行了对比试验。结果表明，建立的双重PCR方法特异性强、敏感性高，可扩增出5.63ng的总核酸量;与试纸条方法相比，双重PCR方法对CDV检出率提高了5.56％，对CPV/MEV检出率提高了2.78％。说明该方法可用于检测宠物犬和毛皮动物CDV和CPV/MEV的混合感染。　　 试验二鉴别CDV疫苗株与野毒株RT-PCR-RFLP方法的建立及H基因测序分析　　 CDV野毒株H基因中有一个或两个NdeⅠ酶切位点，而疫苗株H基因中缺少这个酶切位点。因此通过这个酶切位点的差异，可以用来区分CDV疫苗株与野毒株。本研究设计了扩增H基因的一对特异性引物，并利用RFLP分析技术建立了用于区分CDV疫苗株与野毒株RT-PCR-RFLP检测方法，对2010-2011年间水貂、貉、狐狸、犬临床病例感染的CDV进行疫苗毒与野毒区分，对15份确定为野毒感染样品的H基因进行克隆测序。应用MegAlign、MEGA5、NetNGlyc1.0软件将测序结果与国内外参考毒株进行比对，并进行核苷酸同源性比较、进化树分析及潜在N-连接糖基化位点分析等。结果表明，15个样品中测得的H基因编码区全长为1824bp，与国内外参考毒株H基因编码区核苷酸同源性为91.1％-99.8％，推导氨基酸同源性为89.0％-99.8％，都属于野毒株谱系，在基因型上与国内大部分分离株同属于Asia-1型。　　 试验三表达水貂犬瘟热病毒SLAM受体Vero细胞系的初步构建　　 信号淋巴细胞激活分子(Signalinglymphocyteactivationmolecule，SLAM)是CDV感染宿主的主要受体，本文旨在建立稳定表达水貂SLAM的Vero细胞系，用于CDV分离和体外研究。本研究用PCR的方法以克隆有水貂SLAM的pMD18-T为模板扩增目的基因片段，将其定向插入到真核表达载体pIRES2-EGFP中，得到重组表达载体pIRES2-EGFP-mSLAM，利用LipofectamineTM2000Reagent转染到Vero细胞，通过G418和EGFP筛选表达水貂SLAM的阳性Vero细胞，初步建立了表达水貂SLAM的Vero细胞系，命名为Vero-mSLAM细胞系。