自发性脑出血(Spontaneous i ntracerebral hemorrhage,ICH)是一种常见的中风亚型,发病后情况往往很严重,其死亡率高达40%以上,而且生还者往往有明显的神经功能损伤。脑出血的发病人数呈逐年上升的趋势。但是来源于全球多个中心的关于脑出血疗效的Meta分析文献表明,脑出血后,缺乏有效的治疗方法。CD47也被称为整合素相关蛋白,是免疫球蛋白(Ig)超家族中的重要成员。近来研究发现CD47在中枢神经系统中有重要的作用。有体外研究表明,通过病毒转染使神经元CD47过度表达会引起神经元细胞凋亡,血小板反应蛋白(TSPs)结合激活CD47有神经毒性,会触发神经元死亡。1,2同时,近来有研究表明,红细胞上的CD47通过与巨噬细胞表面的抑制性受体信号调节蛋白α (SIRP α)相互作用抑制吞噬。红细胞上CD47的表达降低能促进巨噬细胞对红细胞的的吞噬清除。基于这些研究背景,我们提出了如下问题和设想：CD47在脑出血后表达情况是怎样的?能否通过调节CD47减轻神经元的损伤,减轻脑出血后的神经功能障碍?能否通过调节红细胞表面的CD47的表达,来加速小胶质细胞/巨噬细胞对红细胞的吞噬,加速血肿的清除?为了解决这些问题,我们进行了如下的实验研究：1.研究了猪脑出血模型中CD47的表达情况,以及去铁敏治疗对CD47表达的影响。2.体外实验中观察小胶质细胞/巨噬细胞对红细胞的吞噬现象,并研究了红细胞表面CD47表达变化对吞噬的影响作用。3.利用CD47基因敲除小鼠与野生型小鼠的脑出血动物模型,研究CD47在脑出血后的作用,包括血肿清除的速度、神经细胞死亡、以及神经功能障碍与恢复等。第一部分猪脑出血后CD47表达及相关研究目的：研究猪脑出血后CD47的表达情况,去铁敏治疗对脑出血后CD47表达的影响。方法：采用立体定向脑内注射自体动脉血的方法制作猪的脑出血模型。猪接收安慰剂或去铁敏治疗(50 mg/kg肌注,从脑出血后2小时开始,每12小时1次,持续3天或7天)。于脑出血模型制作后4小时,1天,3天,7天或者14天处死猪。行CD47免疫组化染色,免疫荧光染色,以及Western-Blot分析。结果：脑出血后同侧白质和灰质中CD47的表达水平,从脑出血后4小时开始升高,脑出血后3天达到高峰。在同侧白质和灰质中,CD47表达都明显升高；而对侧白质和灰质中,CD47表达无明显改变。CD47表达于神经元、小胶质细胞/巨噬细胞、少突胶质细胞,但不表达于星形胶质细胞。去铁敏治疗可以减轻脑出血后CD47表达水平的升高。血肿内红细胞上CD47表达随时间推移逐渐降低。第二部分CD47与红细胞吞噬关系的体外研究目的：研究体外培养的小胶质细胞/巨噬细胞对红细胞的吞噬现象。研究红细胞表面CD47表达变化对红细胞吞噬的影响。方法：进行大鼠小胶质细胞/巨噬细胞的培养,用PKH26标记红细胞(年轻红细胞组与衰老红细胞组),将标记好的红细胞加入培养的小胶质细胞/巨噬细胞中。用免疫荧光染色,观察吞噬现象；用流式细胞仪对吞噬进行定量研究。结果：可以在体外观察到小胶质细胞/巨噬细胞对红细胞的吞噬现象；衰老红细胞CD47表达降低,小胶质细胞/巨噬细胞对衰老红细胞的吞噬增加。第三部分CD47基因敲除小鼠与野生型小鼠的脑出血模型目的：比较研究CD47基因敲除小鼠与野生型小鼠在脑出血后,血肿清除速度、神经功能缺损、神经细胞损伤的不同。方法：分别制作自体血注射的CD47基因敲除小鼠与野生型小鼠的脑出血模型。在脑出血后第1天和第8天,行磁共振检查；在脑出血后第1天,第3天和第8天进行神经功能评价；在脑出血后8天处死小鼠,用Fluoro-Jade C染色法检测神经细胞变性坏死。结果：CD47基因敲除小鼠的血肿清除速度比野生型小鼠要快。脑出血同侧脑内Fluoro-Jade C染色阳性细胞数野生型小鼠比CD47基因敲除小鼠多。CD47基因敲除小鼠有较好的神经功能恢复和预后。结论本实验用猪脑出血模型,体外实验,以及通过CD47基因敲除小鼠与野生型小鼠脑出血后的比较,研究脑出血后CD47的表达及其作用,结果表明：1. 脑出血后脑组织中CD47表达升高,而去铁敏可以减轻CD47的升高,说明CD47是反应脑损伤的一个指标。2. 与野生型小鼠相比,CD47基因敲除小鼠脑出血后神经变性坏死减少,有较好预后,说明CD47也是脑出血后脑损伤的一个环节,可以通过这一环节改善脑出血预后。3. 红细胞上CD47表达降低促进红细胞吞噬,CD47基因敲除小鼠脑血肿清除加快。所以,CD47可能成为脑出血后脑损伤的一个监测指标,也可能成为今后脑出血患者治疗的一个重要靶点。