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第一部分hMLHl在卵巢癌组织中的表达及甲基化状态目的检测hMLHl在卵巢癌组织中的蛋白表达水平及其甲基化状态,并分析其与EZH2的相关性。方法1.应用免疫组织化学技术检测hMLHl与EZH2在上皮性卵巢癌和正常卵巢组织中的蛋白表达水平,分析两者的相关性。2.应用焦磷酸测序法检测卵巢癌组织中hMLHl的启动子区甲基化水平,并分析其与hMLHl和EZH2蛋白表达的关联性。结果1. hMLHl在上皮性卵巢癌组织中表达明显降低,EZH2在卵巢癌组织中表达明显升高,且两者表达呈负相关(P<O.05)。2.上皮性卵巢癌组织中hMLHl的甲基化水平与其蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。3. hMLHl的蛋白表达及DNA甲基化水平与上皮性卵巢癌的组织学类型、组织分化程度相关(P<O.05)。结论hMLHl在上皮性卵巢癌中的表达可能受DNA甲基化机制调控,且与EZH2存在关联性。第二部分EZH2基因沉默调控hMLHl表达的体外实验研究目的研究卵巢癌细胞株中EZH2基因沉默对hMLHl表达的影响及其机制。方法1.应用小分子干扰RNA瞬时转染上皮性卵巢癌细胞HO8910、SKOV3、ES2、 OV2008、C13*和A2780,下调卵巢癌细胞中EZH2的表达水平。2.应用短发夹RNA转染C13和A2780,建立稳定转染细胞株,下调EZH2的表达水平。3.应用QRT-PCR、Western-blot及细胞免疫组织化学法检测下调EZH2后hMLHl的mRNA及蛋白表达水平的变化情况。4.应用焦磷酸测序法检测下调EZH2后hMLHl的启动子区DNA甲基化状态的变化情况。结果1.下调EZH2后,hMLHl基因呈未甲基化状态的HO8910、SKOV3、ES2、C13*细胞中,hMLHl的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)；而hMLHl基因呈高甲基化状态的A2780和OV2008细胞中,hMLHl的mRNA和蛋白水平均无明显变化(P>0.05)。2.下调EZH2后,细胞中的hMLHl启动子区甲基化水平无明显变化(P>0.05)。结论上皮性卵巢癌中EZH2可能通过非甲基化机制调控hMLHl的表达。