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目的:
分别建立基于混合表面活性剂选择性作用的可见光匀相清除法和化学发光匀相清除法测定血清高、低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C、LDL-C),并构建相应的检测试剂,以实现血清HDL-C、LDL-C的快速、灵敏测定。
方法:
本研究通过不同类型的表面活性剂与脂蛋白的反应活性、显色定量体系选择、液体酶制剂稳定技术等关键技术研究,分别建立了可见光比色匀相清除法、化学发光匀相清除法测定血清高、低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C、LDL-C)的新方法,并研制了相应的液体稳定试剂。
清除法测定血清HDL-C原理:第一步,用混合表面活性剂将血清标本中的LDL-C、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、乳糜微粒(CM)等脂蛋白组分特异性裂解并清除,第二步,加入表面活性剂使HDL-C裂解并与胆固醇试剂反应,采用可见光匀相比色法、化学发光匀相法进行检测；
清除法测定血清LDL-C原理:第一步,用混合表面活性剂将血清标本中的HDL-C、VLDL-C、CM等脂蛋白组分特异性裂解并清除,第二步,加入表面活性剂使LDL-C裂解并与胆固醇试剂反应,采用可见光匀相比色法、化学发光匀相法进行检测。
结果:
可见光匀相清除法测定血清HDL-C,表面活性剂采用a-环糊精、吐温80、硫酸葡聚糖、泊洛沙姆F124等的组合,显色色源采用新型酚衍生物HDAOS,在全自动生化分析仪上实现HDL-C匀相法检测。以该法测定血清HDL-C,线性范围达3.91mmol/L,平均回收率为99.7％,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.0139～0.0243和0.0167～0.0264,与临床检验操作规程(第3版)推荐的匀相测定法(试剂由日本第一化学药品株式会社提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.013X-0.016、r=0.9975,与临床检验操作规程(第3版)推荐的硫酸葡聚糖-Mg2+沉淀法(试剂由浙江东瓯生物工程有限公司提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.999X-0.010、r=0.9956,健康人群的血清HDL-C为1.09～2.25mmol/L(男性)、0.90～2.06mmol/L(女性)。
化学发光匀相清除法测定血清HDL-C,表面活性剂采用a-环糊精、吐温80、硫酸葡聚糖、泊洛沙姆 F124等的组合,化学发光体系采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2体系,在微孔板化学发光仪上实现HDL-C的匀相法检测。以该法测定血清HDL-C,线性范围达3.85mmol/L,平均回收率为100.4％,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.0176～0.0313和0.0215～0.0398,与临床检验操作规程推荐的匀相测定法(试剂由日本第一化学药品株式会社提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为 Y=0.996X-0.007、r=0.9978,与临床检验操作规程推荐的硫酸葡聚糖-Mg2+沉淀法(试剂由浙江东瓯生物工程有限公司提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.999X-0.002、r=0.9974,健康人群的血清HDL-C为1.09～2.21mmol/L(男性)、0.93～2.01mmol/L(女性)。
可见光匀相清除法测定血清LDL-C,表面活性剂采用三甲基-β-环糊精、环氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆 F88、布里杰-58等的组合,显色色源采用新型酚衍生物HDAOS,在全自动生化分析仪上实现LDL-C匀相法检测。以该法测定血清LDL-C,线性范围达12.91mmol/L,平均回收率为100.7％,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.0036～0.0134和0.0063～0.0147,与临床检验操作规程推荐的匀相测定法(试剂由日本第一化学药品株式会社提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.017X-0.051、r=0.9981,与临床检验操作规程推荐的聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚沉淀法(PVS法,试剂由浙江东瓯生物工程有限公司提供)相比、线性回归方程和相关系数分别为Y=0.993X+0.011、r=0.9990,健康人群的血清LDL-C为2.07～3.11mmol/L。.
化学发光匀相清除法测定血清LDL-C,表面活性剂采用三甲基-β-环糊精、环氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆 F88、布里杰-58等的组合,化学发光体系采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2体系,在微孔板化学发光仪上实现LDL-C的匀相法检测。以该法测定血清LDL-C,线性范围为12.95mmol/L,平均回收率为101.2％,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.0126～0.0245和0.0153～0.0316,与临床检验操作规程推荐的匀相测定法(试剂由日本第一化学药品株式会社提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.968X+0.074、r=0.9933,与临床检验操作规程推荐的聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚沉淀法(PVS法,试剂由浙江东瓯生物工程有限公司提供)相比,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.946X十0.129、r=0.9944,健康人群的血清LDL-C为2.01～3.01mmol/L。
结论:
本研究所建立的可见光比色匀相清除法、化学发光匀相清除法测定血清高、低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C、LDL-C)的新方法,各项方法学指标满足临床实际应用需要,具有选择性好、灵敏度高、测定简便等特点,可满足具备全自动生化分析仪、微孔板化学发光仪的临床实验室检测需要,适合临床推广应用。