VvCIP8互作的E2筛选和葡萄E2 Ⅵ亚家族基因的功能分析

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lanxuexiao
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葡萄种子的败育和果皮的着色等一系列过程与泛素化降解有关,为了探究葡萄E2在其过程中发挥的功能,本试验鉴定了葡萄E2家族基因;以‘黑比诺’、‘无核白’、‘杨格尔’不同发育时期的种子和‘黑比诺’、‘无核白’不同发育时期的果皮为材料,分析了E2基因在葡萄种子和果皮中的表达规律;分别以‘黑比诺’葡萄的根、茎、叶、花、花蕾、卷须和种子为材料,利用半定量PCR技术研究了E2家族基因在葡萄不同组织的特异表达情况;通过酵母双杂交技术筛选了与葡萄VvCIP8互作的E2基因并用双分子荧光互补技术进行验证;分析了E2Ⅵ亚家族基因的亚细胞定位情况,并通过瞬转葡萄果实初步探究其功能。本试验主要得到了以下4方面的研究结果:1、鉴定了葡萄E2家族基因。以拟南芥E2家族基因为基础,通过葡萄基因组数据库的鉴定,成功获得了46个葡萄E2家族基因(包括42个UBC基因和4个UEV基因)。根据进化树分析将葡萄E2家族蛋白分为16个亚家族,根据UBC结构域N端和C端的结构不同将其分为4大类。2、分析了E2家族基因的表达规律。葡萄E2家族基因在‘黑比诺’、‘无核白’和‘杨格尔’幼种子中的表达模式差异很大。大多数E2基因在‘无核白’种子发育的各个时期中相对表达量最高,可能参与种子败育的过程。VvUBC1、VvUBC31和VvUBC38在‘杨格尔’种子中的相对表达量最高,VvUBC2在‘黑比诺’种子中的相对表达量最高。通过葡萄果皮转录组数据筛选出在葡萄果皮中表达的基因VvUBC1、VvUBC8、VvUBC9、VvUBC10、VvUBC13、VvUBC28和VvUBC39,利用qRT-PCR分析发现它们的相对表达量在葡萄果皮发育的不同时期差异很大。在果皮发育的前期,VvUBC1、VvUBC13、VvUBC28和VvUBC39在‘无核白’中的相对表达量较高,在果皮发育的后期,其相对表达量在‘黑比诺’中较高,VvUBC9和VvUBC13的表达模式与之相反。3、筛选了与E3泛素连接酶VvCIP8互作的E2蛋白。通过酵母双杂交技术验证出VvUBC8、VvUBC9、VvUBC10、VvUBC28、VvUBC29、VvUBC30、VvUBC47、VvUBC16a、VvUBC16b、VvUBC19和VvUBC21与VvCIP8互作,用双分子荧光互补技术进一步验证VvUBC8、VvUBC9、VvUBC10、VvUBC28、VvUBC29、VvUBC30和VvUBC47与VvCIP8互作。通过亚细胞定位技术发现VvUBC8、VvUBC9、VvUBC10、VvUBC28、VvUBC29、VvUBC30、VvUBC47和VvCIP8定位在细胞质和细胞核。4、初步探究了葡萄E2Ⅵ亚家族基因的功能。通过‘黑比诺’和‘赤霞珠’葡萄果实的瞬时转化实验初步验证了葡萄E2Ⅵ亚家族基因的功能,发现它们参与了葡萄果皮着色的过程,促进葡萄果皮着色。VvUBC8和VvUBC29促进果皮着色的效果明显。
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