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研究发现,在多种人类肿瘤中雌激素受体特异性高表达,这预示着雌激素受体可能是一个针对肿瘤治疗的潜在靶点。本课题旨在研制开发一种靶向于雌激素受体的长循环米托蒽醌脂质体新制剂(ES-SSL-MTO),以期对雌激素受体高表达的白血病具有更好的治疗效果。首先,利用两步化学反应将雌酮(一种雌激素受体的配体)与二硬酯酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-氨基(DSPE-PEG2000-NH2)偶联合成靶向于雌激素受体的靶向片段二硬酯酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-雌酮(DSPE-PEG2000-ES)。中间产物和终产物均采用核磁共振谱和质谱检测进行结构鉴定。实验结果表明,经核磁共振氢谱鉴定合成终产物为DSPE-PEG2000-ES;将原料(DSPE-PEG2000-NH2)及产物进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测,DSPE-PEG2000-NH2和产物测得分子量分别为2175 Da和2521 Da,产物分子量与理论值相符。两步化学反应产率分别为98%和72%。采用硫酸铵梯度法制备ES-SSL-MTO,并考察制剂配方及制备条件对其包封率的影响,例如药脂摩尔比、用于薄膜水化的硫酸铵溶液体积、空脂质体与米托蒽醌共同孵育的时间和温度。实验结果显示:对ES-SSL-MTO的制备工艺中的关键步骤进行条件优化,得出了制备MTO脂质体的最佳条件,即药脂摩尔比1:15,20 m L硫酸铵溶液水化,米托蒽醌与脂质体共同孵育温度为37℃,孵育时间为2 h。而后,对ES-SSL-MTO进行相关表征研究,包括透析法分离游离药物后,采用紫外可见分光光度计检测米托蒽醌脂质体的包封率并计算载药量;采用动态光散射粒度分析仪检测其粒径及粒径分布、多分散系数和Zeta电位;采用透射电子显微镜进行形态学观察;采用透析法分别检测4℃和25℃条件下储存不同时间的米托蒽醌脂质体制剂的渗漏率;与胎牛血清在37℃共同孵育以考察米托蒽醌脂质体体外释放行为。实验结果显示:ES-SSL-MTO的平均粒径约为140 nm,且粒径均一,适用于静脉给药;Zeta电位为1.54±0.53 m V,多分散系数为0.12±0.008;ES-SSL-MTO和SSL-MTO的稳定性显著优于单纯靶向米托蒽醌脂质体(ES-L-MTO)和普通脂质体(L-MTO),ES-SSL-MTO保存48 h的渗漏率不超过8%。接下来对雌激素受体靶向长循环脂质体(ES-SSL)体内外靶向性进行研究。HL-60细胞分别与装载有香豆素-6的ES-SSL及非靶向长循环脂质体(SSL)孵育4h,采用流式细胞仪检测荧光阳性细胞数量;为探索细胞对ES-SSL的摄取机制,将细胞与不同内吞抑制剂分别孵育30 min后加入装载香豆素-6的ES-SSL,4 h后采用流式细胞仪检测细胞内荧光强度;为考察靶向长循环脂质体制剂在小鼠体内的分布情况,制备HL-60细胞皮下移植瘤模型,分别尾静脉注射装载DiR的ES-SSL和SSL,采用小动物活体成像系统于不同时间点检测小鼠体内的荧光分布情况。实验结果表明:在细胞摄取实验中,HL-60细胞与装载香豆素-6的ES-SSL共同孵育4 h后荧光阳性细胞约是SSL的17倍,表明ES-SSL可特异性被肿瘤细胞识别并通过受体介导的内吞被细胞摄取;蔗糖、染料木黄酮和盐酸阿米洛利可抑制细胞对ES-SSL的摄取,表明网格蛋白依赖的内吞、小窝蛋白依赖的内吞和巨胞饮均是主要的ES-SSL细胞摄取方式。体内靶向性实验结果显示SSL多在HL-60细胞荷瘤小鼠肝脏富集,而ES-SSL在肿瘤组织的分布高于SSL,给药6 h后达到分布高峰,并且24 h时还可观测到荧光。最后,通过体内、外抗肿瘤实验考察ES-SSL-MTO的抗肿瘤活性。采用CCK-8试剂盒检测米托蒽醌及其脂质体制剂对HL-60细胞的抗增殖作用,采用HL-60细胞小鼠皮下移植瘤模型对米托蒽醌及其脂质体制剂抑瘤作用进行研究。结果表明:体外抗肿瘤实验中,ES-SSL-MTO的抗细胞增殖作用最强,且具有剂量和作用时间依赖性,其48 h半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)为0.79 ng/m L,显著低于SSL-MTO(2.15 ng/mL)。体内抗肿瘤实验结果显示,ES-SSL-MTO的肿瘤增殖抑率为86.03%,可有效抑制HL-60细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长,且显著优于米托蒽醌其他脂质体制剂。综上所述,本课题成功制备了一种雌酮修饰的米托蒽醌长循环脂质体新制剂,其包封率高,粒径均一,且稳定性好,是一种可特异性有效抑制雌激素受体高表达的肿瘤细胞生长的米托蒽醌载药系统,为米托蒽醌的肿瘤治疗提供了新的实验数据,具有潜在的临床应用价值。