论文部分内容阅读
耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans)是世界上最耐辐射的物种之一，对各种DNA损伤介质具有超强的抗性，已成为研究基因组完整性和稳定性的一种理想模式生物。本实验室的研究结果显示，一个被注释为CRP/FNR家族的基因ddrⅠ(基因编号为dr0997)，在DNA受损时被显著诱导表达，可能贡献于耐辐射球菌的极端抗性。因此，我们重点围绕该基因进行了研究。
1.分别构建了dr0997及其同源基因dr1646的基因缺失突变株，并发现突变株相对于野生株，生长情况出现了明显的延滞。
2.分析了△DR0997突变株对DNA损伤因子的抗性。结果表明：dr0997和dr1646对UV和氧化损伤抗性的贡献都不大。而△DR0997突变株对γ-射线辐照处理很敏感，表明该基因可能与电离辐射造成的双链断裂修复有关。
3.用DNA微阵列技术分析了突变株相对于野生株的转录谱变化。本研究覆盖了3033个基因，占整个基因组的95.26％。DR0997的缺失导致28个基因的转录水平明显上调，另外79个基因明显下调，这些基因很多涉及NADPH、乙酰辅酶A合成酶等的转录合成，表明dr0997可能参与调控了相关途径。
4.表达并纯化了DR0997重组蛋白。通过测序，我们证实对该基因在Genebank的ORF是错误的，其实际长度为612 bp，我们以新序列为标准克隆了dr0997基因，并最终成功在体外表达并纯化了DR0997重组蛋白。
综上所述，耐辐射球菌的DR0997基因对其极端抗性很重要。它是一个具有特异性DNA结合活性的代谢调节基因，主要通过调控与细菌抗氧化和DNA修复相关的途径起作用。它与重要蛋白PprⅠ和RecA的相互关系正在探索之中。