Ⅰ、籼稻转基因后代的遗传稳定性Ⅱ、Ds转基因水稻在Ac因子作用下Ds因子的切离和旁邻序列的克隆

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对转基因植株分别进行了GUS活性测定和PCR检测结果显示:经二次潮霉筛选获得的转基因植株,92﹪的植株GUS检测呈阳性反应,并能正常结实,在T1种子的胚乳中也能检测到GUS染色的分离,证明外源基因确已导入这些植株中,而且,能正常遗传.在抗性愈伤组织的分化中,试验了潮霉素对分化的影响,结果显示:不添加潮霉素,能明显地提高绿苗频率,但是,转基因植株的可靠性也随之下降.通过农杆菌介导的遗传转化方法,获得了籼稻龙特甫B的15株转基因植株,经PCR和Southern检测,证明蜡质基因反义片段已被导入转基因植株中.在Ds转基因植株和Ac转基因植株杂交的后代中,通过PCR测定,选择了309个Ac和Ds因子共存的单株,用检测Ds切离的引物,对上述单株进行PCR分析,在119个单株中检测到Ds因子从原插入位点切离,切离频率为38.5﹪,并发现Ds作母本的组合中,单株Ds切离频率高于Ac作母本的组合;通过对部分Ds切离单株的Ds旁邻序列克隆,获得了14个阳性克隆;其中8个获得DNA测序结果,经过比较,有5个证明是Ds因子从原位点切离后的Ds旁邻序列.
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