两种泥鳅中ER基因的克隆与时空表达

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本研究分别用不同浓度的雌激素E<,2>和雄激素MT浸泡处理孵出后5d的泥鳅和大鳞副泥鳅,120d后解剖性腺确定性别比例:在cDNA水平克隆两种泥鳅雌激素受体基因,对其进行序列分析,并比较其在两种泥鳅不同性别成体各组织及不同胚胎发育阶段的表达。旨在深入研究两种泥鳅性腺发育、性别分化和性逆转的分子机制,为人工控制泥鳅性别提供基础资料。 孵出后5d的鱼苗分别置于12.5、25、50、75、100μg/L E<,2>,12.5、25、50μg/L MT中,使其发育。120d后经性腺检查发现,持续激素处理导致幼苗的死亡和性反转。随着E<,2>浓度的升高,两种泥鳅中雌性个体所占的比例明显升高;同样,随着MT浓度的升高,两种泥鳅中雄性个体所占的比例也明显升高,当MT浓度达到50μg/L时,得到100%雄性泥鳅。 根据已知硬骨鱼雌激素受体ER基因序列设计简并引物,用PCR技术分别扩增并克隆出了两种泥鳅的ERα和ERβ的cDNA片段。其中,泥鳅ERα片段和大鳞副泥鳅ERα片段均长936bp;泥鳅ERβ片段和大鳞副泥鳅ERβ片段分别长809bp和794bp。所得序列输入Genbank进行同源性检索,其最高同源性分别对应于DrERa(89.6%)、DrERa(90.0%)、.DrERβ(73.9%)、DrERβ(72.8%),依据ER基因的命名规则,我们将其分别命名为MaERα、PdERα、MaERβ、PdERβ。 结果表明,ERa在两种泥鳅不同性别成体组织中具有大致相似的表达模式,在肾和脑组织中表达量较高,在肝、心、卵巢、精巢中表达量稍低;在胚胎中二者的表达模式差异较大,MaERα在尾芽期表达量最高,其次是卵黄吸收期、神经胚,PdERα在卵黄吸收期表达量最高,其次是孵出期、尾芽期。ERβ基因在两种泥鳅不同性别成体组织中的表达模式也大致相似,在卵巢和精巢中表达量最高,肝组织和心脏中表达量最低;在胚胎中二者的表达模式差异明显,MaERβ在原肠胚期表达量最高,孵出期和卵黄吸收期表达量比较低,PdERβ在原肠胚期表达量最高,神经胚期表达量最低,此后从尾芽期到孵出期、卵黄吸收期表达量逐渐升高。
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