番茄AFLP分子遗传连锁图谱的构建及抗病基因Multi-caps标记识别体系建立

被引量 : 13次 | 上传用户:yangweifeng111222
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究利用优良栽培番茄品系99165-30与高抗晚疫病不同生理小种的野生多毛番茄LA1777远缘杂交,所获得的F2及其以后世代单粒传得到的F5:6代重组自交系分离群体构建番茄永久饱和的分子遗传图谱,并利用荧光AFLP技术,构建了番茄遗传连锁图谱框架图。同时,针对目前生产中番茄主要病害,利用番茄分子生物学研究的信息和近等基因系,建立了番茄抗番茄根节线虫病基因Mi基因、抗番茄斑萎病毒病基因SW-5基因、抗番茄花叶病毒基因Tm22基因、Tm-1基因、Tm-2基的SCAR标记稳定扩增体系,并在此基础上开发了可以对Mi、Tm22、Sw-5等2个及3个抗病基因同时鉴定筛选的多重PCR体系。主要结果如下: 1.利用银染AFLP方法,从64对E/M的AFLP引物组合中筛选出20对扩增清晰、再现性好的多态性引物;20对引物共扩增出274条多态性条带,平均每对AFLP引物组合扩增出13.7个多态性谱带,其多态性谱带高于目前其他分子标记方法,说明这种方法是一种高效的建图方法。 2.首次利用荧光AFLP方法,对RIL群体中产生分离的274个AFLP标记用JoinMap3.0软件进行分析,得到一张包含125个标记的18个连锁群的遗传图谱,覆盖基因组长度为662cM,标记间平均图距为5.3cM。连锁群长度集中在14~58cM之间,连锁群上的标记数在3~22之间。故此连锁群遗传图谱标记数目高于其他方法。 3.以分别含有五种抗病基因的番茄近等基因系为试材,建立了番茄抗病基因的SCAR-CAPS优化体系,即:50ng模板DNA、2.5μl 10×PCR buffer、200μM dNTPs、1.5UTaq DNA聚合酶、1.5-2.5mM Mg2+,每个引物的浓度为0.2μM,最终体积为25μl。 4.利用上述番茄抗病基因的SCAR-CAPS优化体系,以含五种抗病基因的番茄近等基因系为试材,并利用所设计的5种SCAR正反引物进行扩增,结果表明: ①SCAR1正反引物进行扩增,无论是抗根结线虫材料还是感病材料均只扩增出750bp的特异性片段;经TaqⅠ酶切后,抗根结线虫纯合基因型及杂合基因型材料均存在酶切位点,其中纯合基因型Motelle和Mogeor抗病材料分别产生了570bp和180bp大小的特异性片段,而感病纯合基因型Moneymaker、Movione、Mobaci、Moperou、Mospomor不可以被TaqⅠ切开,仍然呈现原来的750bp的片段。说明利用本引物可用于番茄Mi抗病基因辅助选育。 ②SCAR2正反引物进行扩增试材,只有抗斑萎病材料显性片段为400bp,即抗斑萎病基因型材料产生了400bp的特异产物,感病材料均无PCR产物。且PCR产物无TaqⅠ酶切、HindⅢ酶位点。可用于番茄Sw-5抗病基因辅助选育。 ③SCAR3正反引物扩增试材,无论是抗病材料还是感病材料均都扩增出950bp的特异性片段,经HindⅢ酶切后,纯合感病基因型材料存在酶切位点,其中纯合感病基因型Moneymaker、Motelle、Movione、Mobaci、Moperou、产生了500bp和450bp大小的
其他文献
企业内部会计监督始终是会计工作中的一项基本职能,是现代企业管理的重要组成部分,其目的是为了维护国家财经纪律,维护国家和集体利益。然而,现行企业内部会计监督职能由于种
长期以来,农民工作为城市中的一个边缘群体,一直被排除在城市养老保障体系之外,同时也游离于农村养老保障体系之外。近年来,随着我国城市化进程的加快,农民工的数量越来越多,
柔性制造系统(FMS)是当前制造业的一个重要发展方向,是正在迅速发展和应用的高新技术之一。本文建立了基于仿真的FMS递阶分布式控制系统体系结构。在利用面向对象思想对FMS实
<正>胸腔积液是许多疾病常见的一种病理过程,主要表现为咳嗽、胸部不适、呼吸困难等症状。中医学多将其归属"悬饮"范畴[1],兹选取黄文政教授治疗胸腔积液验案1以介绍。金某,
现代化运动将西方导入了一个无论在日常生活、社会制度、价值观念还是在思想方式上都迥然有别于传统社会的全新世界。人在这个世界中不再是“神”的奴从,他们用理性将“神”踩
<正>思想政治工作是一切工作的生命线,对一个新成立单位更是工作的源泉和动力。吴兴区疾病预防控制中心于2007年成立,在人员组合、资产组合、职能调整等变动情况下,带来了一
在我国城市高层建筑和道路、桥梁的地基基础中大部分使用桩基础,主要是因为它拥有抗地震性能好、承载力高以及可以解决特殊地基土承受力等多方面的优点。能对单桩承载力和桩
对主变压器测温回路的结构和工作原理进行了探讨,就缺陷问题进行了分析。
预应力混凝土-钢槽梁结合梁是在混凝土梁和钢梁的基础上,经过结构的不断优化下提出并在实际工程中初次得以应用的一种新的组合结构形式,该形式解决了钢筋混凝土箱梁自重过大,相