【摘 要】
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根据已发表的鸭瘟病毒(DEV)gH,TK,UL24基因序列,设计合成了1对引物,用PCR法对DEV疫苗株的gH-TK-UL24基因进行了全片段扩增,产物克隆至pMD-18T载体并测序。结果显示:插入片段
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根据已发表的鸭瘟病毒(DEV)gH,TK,UL24基因序列,设计合成了1对引物,用PCR法对DEV疫苗株的gH-TK-UL24基因进行了全片段扩增,产物克隆至pMD-18T载体并测序。结果显示:插入片段全长5021bp,包括三个ORF,分别编码gH,TK,UL24基因。与GenBank中已登录的DEV同源基因进行比较,发现gH,TK,UL24基因核苷酸序列同源性分别在99.8%-100%,99.5%-100%,99.8%-100%之间;推导的氨基酸序列同源性分别在99.6%-100%,99.5%-100%,99.8%-100%之间。与24株α疱疹病毒参考株系统发育进化树分析发现,鸭瘟病毒与马立克氏病病毒亲缘关系最近,但在三种基因进化树中均形成独立的一个分支。建议在α疱疹病毒亚科建立新的病毒属——类鸭瘟病毒属。将鸭瘟病毒TK-UL24 DNA片段克隆于pMD18-T载体中,构建了pTK质粒;将PCR扩增的GFP真核表达盒插入pTK质粒的TK基因内部,获得转移载体质粒pTK-GFP。鸭瘟病毒TK-UL24测序分析表明鸭瘟强、弱毒株TK基因序列完全相同;转移载体携带Pcmv-GFP-SV40pA表达盒,测序验证其序列与源序列一致。pTK-GFP在脂质体介导下,转染鸭胚成纤维细胞和鸭肾细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。质粒转染细胞后,绿色荧光蛋白得到了有效的表达。鸭瘟病毒TK基因转移质粒的成功构建,为进一步开展重组鸭瘟病毒的研究和构建具有遗传标记的鸭瘟疫苗奠定了基础。
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