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金银花作为我国常用大宗药材,在中药临床处方、中成药、保健饮料、食品等方面都被广泛应用。环烯醚萜苷类成分是金银花中的重要活性物质,现代药理研究证明其具有保肝利胆、抗炎镇痛、解热、抗病毒等作用,但国内外对于金银花中化学成分和药理作用的研究多集中在咖啡酰奎宁酸类、黄酮类等化学成分的研究上,对于环烯醚萜苷类的研究略显不足,环烯醚萜苷在金银花中的作用和地位也一直被忽视。另外,在金银花的质量评价体系中,评价标准围绕绿原酸和木犀草苷进行,并不能反应金银花在保肝利胆等方面的功效。所以仅仅以这两种化合物作为质量评价的指标具有一定的局限性,因此,建立一套金银花中环烯醚萜苷的提取净化、分析测定方法以及富集纯化工艺,对金银花的质量评价和环烯醚萜苷类组分的开发具有重要意义。 本论文分为四个部分,主要内容如下: 第一章绪论概述了金银花以及环烯醚萜苷的研究进展,主要对金银花的活性及应用,环烯醚萜苷类成分及药理活性,环烯醚萜苷的提取分析方法进行了概述。 第二章建立了分散固相萃取-高效液相色谱法提取、净化和分析金银花中环烯醚萜苷类成分的方法,方法采用超声提取法提取金银花,对提取溶剂、提取时间和料液比三个因素进行了优化;采用不同净化材料进行快速净化,对净化剂类型、净化剂用量、净化时间进行了优化,同时建立了同时分析测定金银花中六种环烯醚萜苷的高效液相色谱条件。 本方法拓展了分散固相萃取技术在中药材中活性成分提取、净化中的应用,为金银花中成药复杂基质中环烯醚萜苷类成分的提取、净化和分析研究提供了方法和技术支持。 第三章应用分散固相萃取-高效液相色谱法分别对不同品种金银花、中成药-连花清瘟胶囊以及干燥过程中的金银花药材中环烯醚萜苷类成分含量进行了测定,研究表明: (1)不同品种的金银花中6种环烯醚萜苷类成分含量差异较大,金银花种质选择需综合考虑各环烯醚萜苷含量; (2)连花清瘟胶囊中六种环烯醚萜苷类成分总含量在1.15-1.33 mg/g之间,总含量平均值为1.22 mg/g;其中,含量较高的成分主要是马钱酸、当药苷和断氧化马钱子苷,含量平均值分别为0.46 mg/g、0.23 mg/g和0.34 mg/g; (3)低温干燥过程中,当药苷、断氧化马钱子苷、secologain dimethylacetal的含量增加,莫诺苷含量降低,马钱酸含量变化较小,具体变化原因,需进一步研究。 该研究为金银花品种选择和产后加工过程的质量控制提供了方法和数据支持。 第四章研究建立了大孔吸附树脂富集纯化金银花中环烯醚萜苷成分的方法,实验比较了11种不同型号的大孔吸附树脂,除了以六种已有环烯醚萜苷成分作为标准以外,还引用了已初步确定为环烯醚萜苷的色谱峰作为标准,更加全面准确地优选出HPD-826大孔吸附树脂,同时对其动态吸附性能和洗脱工艺进行了考察优化,确定了吸附和洗脱工艺。该方法适合工业化放大生产,对于大量分离纯化金银花中环烯醚萜苷,具有十分重要的意义。 第五章研究了金银花中环烯醚萜苷类成分对CCl4诱导斑马鱼急性肝损伤模型的保肝效果,实验以发育72 h的肝脏荧光转基因斑马鱼幼鱼为实验对象,荧光显微镜下观察幼鱼肝脏形态变化。实验结果表明,与CCl4肝损伤的斑马鱼对比,经大孔树脂富集的金银花环烯醚萜苷粗提物及马钱酸、莫诺苷、当药苷、断氧化马钱子苷成分对斑马鱼肝损伤有较好保护作用。