人参茎组织培养研究

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为了克服人参林地栽参面积逐年减少,人参常规育种时间漫长等缺点,采用组织培养的方法建立人参无性繁殖体系,培育组培新品种可能是人参新品种育种的新途径。本文以人参根、茎、叶、芽胞为外植体,探讨了最适消毒方法和人参愈伤组织诱导最适外植体;以五年生、四年生、三年生和两年生人参茎为外植体,探讨了最适年龄的人参茎外植体对人参茎愈伤组织诱导的影响;在MS培养基中单独添加2,4-D和2,4-D与6-BA配合使用对人参茎愈伤组织诱导的影响;人参茎愈伤组织继代培养基的筛选;2,4-D与6-BA配合使用对不定芽诱导的影响;人参再生苗增殖培养基的筛选;基本培养基、活性炭含量、IBA和NAA的添加对人参再生苗不定根诱导的影响。结果表明:1.人参根外植体消毒效果最好的处理是0.1%HgCl2 8 min,存活率达50%;人参芽胞外植体消毒效果最好的处理是2%NaClO2 24 min,存活率达90%;人参茎外植体消毒效果最好的处理是0.1%HgCl3 4 min,存活率达70%;人参叶外植体消毒效果最好的处理是2%NaClO2 10 min,存活率达45%。2.人参根、茎、叶和芽胞四种外植体中茎的愈伤组织诱导率最高,为55.71%。在五年生、四年生、三年生和两年生人参茎外植体中,五年生人参茎愈伤组织诱导率最高,为54.43%。3.单独添加2,4-D即可诱导出入参茎愈伤组织,MS+2,4-D2 mg/L时人参茎愈伤组织诱导率最高,为56.70%。4.2,4-D和6-BA配合使用,按人参茎愈伤组织的诱导率建立的最优回归方程为y=-15.907+62.845x1-12.242x12-242.003x22;,当2,4-D浓度为2.57(mg/L),6-BA为0.00(mg/L)时,可获最高诱导率64.75(%)。说明2,4-D是诱导人参愈伤组织的主要激素,而6-BA的作用甚微或几乎不影响。5.2,4-D和6-BA配合使用继代培养人参茎愈伤组织,10种培养基中继代培养最好的培养基为S7,即MS+2,4-D 2.00 mg/L+6-BA 0.10 mg/L.6.2,4-D浓度在2.00 mg/L,6-BA浓度范围在0.00-0.10 mg/L时,有利于人参茎愈伤组织诱导出不定芽。人参茎愈伤组织分化最好的培养基为MS+2,4-D2.000 mg/L+6-BA0.075 mg/L,分化率达24.44%。7.从人参茎愈伤组织中生成的人参不定芽增殖数量最多的培养基MS+TDZ3.0 mg/L+IBA0.3 mg/L+GA3.0 mg/L,平均每个带芽点的愈伤组织增殖8.1株人参再生苗,鲜物重最大值为491.7mg。8.人参再生苗诱导不定根较好的基本培养基为1/2MS培养基和1/2SH培养基;1/2MS+IBA2 mg/L+O.1%活性炭和1/2SH+NAA0.5 mg/L+0.1%活性炭培养基不定根诱导率最高,达40%。
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