论文部分内容阅读
目的 制备抗人类神经元信号蛋白14-3-3zeta的多克隆抗体与单克隆抗体，为细胞信号传导及神经系统退行性疾病的诊断提供标志物。方法 用纯化的重组人脑14-3-3信号蛋白(rh14-3-3 zeta)免疫家兔，制备抗rh14-3-3 zeta多克隆抗血清，以免疫双扩散法测定血清抗体效价，并以盐析法对多克隆抗血清进行初步纯化；电洗脱、透析纯化rh14-3-3zeta蛋白，免疫BALB／c小鼠3-4次后，取致敏的脾细胞和HGPRT~-SP2／0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，在HAT选择培养基中选择培养，间接ELISA法筛选阳性克隆，挑取分泌抗体的杂交瘤细胞株；用有限稀释法进行亚克隆，再用间接ELISA筛选，Western-blot进行鉴定，最终获得抗rh14-3-3zeta的阳性杂交瘤细胞株F7株；将细胞株注入小鼠腹腔，得到小鼠腹水后，经盐析法初步纯化该单克隆抗体；测定所得抗体效价及其特异性反应。结果获得大量纯化的rh14-3-3zeta表达产物；制备的多克隆抗血清双向免疫扩散效价达1：8～1：64；获得一株能稳定分泌抗rh14-3-3zeta单抗的杂交瘤细胞株，其亚型为IgG1型，腹水效价达到1×10~6。该株单抗经Western-blot等鉴定可与rh14-3-3zeta蛋白发生特异性反应。结论 获得了敏感、特异的抗rh14-3-3zeta多克隆抗血清及稳定分泌抗rh14-3-3zeta单抗的杂交瘤细胞株，为细胞信号转导及神经系统退行性疾病的诊断提供分子标记。