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研究背景: 脑卒中是目前危害人类生命和健康最严重的疾病之一。近年来,随着社会环境和国民起居饮食结构的变化,脑卒中发病率逐年增高。回顾全国第三次死因抽样调查统计,脑卒中已经跃居为第一位死亡原因。据统计,缺血性脑卒中占脑血管病的75%~90%,而颈动脉粥样硬化斑块的发生、发展及不稳定性是引起缺血性脑卒中的重要危险因素。然而,目前导致人颈动脉粥样硬化斑块形成及其不稳定性的相关基因尚不清楚,且尚未发现能够反映颈动脉血管炎症反应的特异性较高标志物。因此,寻找导致人颈动脉粥样硬化斑块发生、发展及不稳定的相关基因及特异性较高标志物,尽早采取相应干预措施显得尤为重要。大量研究发现,炎症反应在动脉粥样硬化发生、发展,以及粥样硬化斑块破裂并发血栓形成、栓子脱落的所有阶段均具有重要作用。脂联素(APN)为一种脂肪源性血浆激素蛋白,具有抗炎作用。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)在炎症反应中分别起着关键及核心调节作用。因此,APN、TNF-α、IL-6均可能在人颈动脉粥样硬化斑块的发生、发展及稳定性方面起着一定的作用。目前国内外关于APN基因在冠状动脉粥样硬化方面已有一些研究,但APN、TNF-α、IL-6与人颈动脉粥样硬化斑块的关系研究报道较少。 目的: 本研究通过检测APN在人颈动脉粥样硬化斑块组织和人肠系膜上动脉的表达变化,以及测定TNF-α、IL-6在人颈动脉粥样硬化斑块组及健康对照组血清中的含量,来探讨APN、TNF-α、IL-6与人颈动脉粥样硬化斑块的发生、发展以及稳定性的关系。 方法: 收集48例人颈动脉粥样硬化斑块标本作为实验组(A组);根据颈动脉CTA检查结果将人颈动脉斑块标本分为软斑块组(A1,n=16),混合斑块组(A2,n=16),硬斑块组(A3,n=16)。收集25例人肠系膜上动脉标本作为标本对照组(B组,n=25)。收集25例体检健康者作为健康对照组(C组,n=25)。 1.采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase.polymerase chain reaction,RT-PCR)检测48例人颈动脉粥样硬化斑块标本(软斑块16例、混合斑块16例、硬斑块16例)和25例人肠系膜上动脉标本中APNmRNA的表达水平。 2.采用Westernblotting的方法检测48例人颈动脉粥样硬化斑块标本(软斑块16例、混合斑块16例、硬斑块16例)和25例人肠系膜上动脉标本中APN蛋白的表达水平。 3.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测48例人颈动脉粥样硬化斑块标本(软斑块16例、混合斑块16例、硬斑块16例)和25例体检健康者血清中TNF-α、IL-6水平。 4.应用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析。各组间血清TNF-α、IL-6水平及APNmRNA及蛋白表达水平均采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;颈动脉斑块组APN蛋白表达水平与血清TNF-α、IL-6水平之间相关性采用Pearson相关分析方法;各组间一般临床资料比较采用x2检验。检验水准α=0.05。 结果: 1.APNmRNA及蛋白的表达水平 颈动脉斑块组APNmRNA及蛋白表达水平较标本对照组明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);软斑块组APNmRNA及蛋白表达水平较硬斑块组显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。 2.各组血清中TNF-α、IL-6水平比较 颈动脉斑块组血清TNF-α、IL-6水平较健康对照组均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。软斑块组血清TNF-α、IL-6水平较硬斑块组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。 3.TNF-α水平与IL-6水平相关性分析 Pearson相关性分析显示:颈动脉斑块组血清中TNF-α水平与IL-6水平呈正相关(P<0.05)。 4.APN蛋白表达水平与TNF-α水平相关性分析 Pearson相关性分析显示:颈动脉斑块组血清中TNF-α水平与APN蛋白表达水平呈明显的负相关(P<0.05)。 5.APN蛋白表达水平与IL-6水平相关性分析 Pearson相关性分析显示:颈动脉斑块组血清中IL-6水平与APN蛋白表达水平呈明显的负相关(P<0.05)。 结论: 1.APN具有抗人颈动脉粥样硬化斑块形成及稳定粥样硬化斑块的作用。 2.TNF-α与IL-6相互作用,共同促进了人颈动脉粥样硬化斑块形成,诱导并加重了人颈动脉粥样硬化斑块的不稳定;它们的高浓度可能预测了血管内皮炎症反应程度加重及颈动脉粥样硬化斑块的易损性增高。 3.通过对APN、TNF-α及IL-6的测定有助于了解人颈动脉粥样硬化斑块的发病程度和预后判断。