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黄褐斑是一种临床常见的色素沉着性皮肤病,多见于东方的中、青年女性,不仅影响容貌,还给患者带来诸多心理、生活方面的烦恼和痛苦。因其发病机理尚未完全阐明,目前的治疗仍是困扰皮肤科医生的难题之一。山柰素是近年来从多种植物中提纯出的天然中药单体,具有多种生物活性,如抗菌剂抗炎等作用。此外,我们先期的研究发现,山柰素对体外不同状态的的酪氨酸酶活性都有明显的抑制作用,呈时效和量效的关系,在培养的人正常黑素细胞中,随着山柰素浓度的升高,对酪氨酸酶及黑素合成的抑制逐渐增强,且对黑素合成抑制作用比国际公认的熊果苷要强(P<0.05)。山柰素虽然表现出对黑素细胞酪氨酸酶活性的抑制作用,但对其增值却无明显的抑制作用,1M时对细胞增殖出现了促进作用,而且发现,随着山柰素浓度增高及作用时间的延长,黑素细胞的树突有多极向两极转化的趋势明显,由此我们推测山柰素是一种细胞毒性小,应用前景良好的酪氨酸酶抑制剂。山柰素的这一特性也是首次发现,以“一种山柰素的新制药用途”申请的国家发明专利于2012年被国家知识产权局授予,为进一步验证其作用的效果,我们将山柰素外用于黑色小鼠的皮肤,观察山柰素对黑色小鼠皮肤黑素合成的影响,为进一步的临床应用和产品开发提供依据。 目的:通过对黑色小鼠皮肤外用不同浓度的山柰素,一方面学习掌握小鼠的饲养方法和外用药膏的制作方法,另一方面更重要的是观察山奈素对黑素小鼠皮肤色素的影响,以验证山柰素在动物模型的作用效果和安全性,为其进一步的临床应用和产品开发打基础。 方法:将60只C57BL黑色小鼠随机的分为六组,每组10只。将四种浓度KPF软膏、只含基质的软膏分别涂抹于小鼠背部约1.5cm×1.5cm大小的区域,剩下10只小鼠不涂抹任何药膏,共8周。用药结束1周后取小鼠受试皮肤,制作病理切片:1、根据色素脱失评分标准目测小鼠皮肤色素脱失情况并统计;2、用苏木精伊红染色法和免疫组织化学染色法染色,观察黑素细胞形态并统计黑素细胞数量;3、用Modified Lillies染色法染色,观察并统计黑素颗粒数量及其才表皮各层分布情况。对实验数据采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析,计量资料如数据为正态分布且方差齐,采用方差分析;如非正态和或方差不齐,采用非参数的秩和检验,并以P<0.05作为具有统计学意义的判断标准。 结果:1、小鼠皮肤受山柰素的影响而产生色素脱失,X2=47.012,差别有统计学意义(P<0.05);仅在山柰素浓度为15%时色素脱失明显,呈现均匀分布的色素脱失,其它浓度影响不明显;2、小鼠表皮黑素细胞的含量并没有受到山柰素的明显影响,F=0.751,差别没有统计学意义(P>0.05);3、小鼠表皮黑素颗粒的含量受山柰素的影响而降低,F=416.923,差别有统计学意义(P<0.05);在5%和15%的浓度下降低的作用明显,其他浓度影响不明显;4、小鼠表皮黑素颗粒分布在山柰素的作用下评分等级降低,X2=81.312,差别有统计学意义(P<0.05),仅在浓度为5%和15%时作用明显,其它浓度作用不明显。 结论:1、山柰素可升高皮肤色素脱失等级,随着山柰素浓度升高皮肤色素脱失等级升高更明显;2、山柰素可以降低小鼠皮肤黑素颗粒的含量,随着山柰素浓度升高黑素颗粒含量降低更明显;3、山柰素对小鼠皮肤黑素细胞含量没有明显的影响;4、山柰素可以降低小鼠表皮黑素颗粒的分布评价等级,随着山柰素浓度升高黑素颗粒分布评价等级降低更明显。