新发现的中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East Respiratory Syndrome coronavirus, MERS-CoV)能够引起人类严重甚至致命的呼吸系统疾病,其致死率超过SARS病毒(-10%),达到37%。然而迄今为止没有有效的治疗和预防方法。中和抗体在多种病毒感染中可以保护宿主免受病毒感染,减缓疾病进程,减轻临床症状。因此,中和抗体具有重要临床应用的价值,能够为未来可能发生的大流行提供重要的战略储备。MERS-CoV的侵染主要依赖于病毒表面的囊膜蛋白S糖蛋白中的受体结合区(Receptor binding domain, RBD)与受体二肽基肽酶(DPP4,又称CD26)之间的相互作用。MERS-RBD主要负责病毒识别受体并与之结合。因此,RBD是MERS-CoV的主要抗原表位。本研究中,利用杂交瘤细胞技术以RBD为免疫原成功筛选出RBD特异的单克隆抗体2E6和4C2。抗体2E6和4C2能够阻碍RBD蛋白与受体CD26的结合并进一步抑制MERS假病毒感染,其ICs0值分别为0.477μg/mL (～3.18 nM),1.4 μg/mL(～9.33nM)。通过表面等离子共振技术检测2E6和4C2抗体与MERS-RBD结合的亲和力分别为76 nM和138 nM。利用Octet RED96生物分子相互作用分析仪确定了4C2与2E6结合抗原时存在竞争关系。通过解析4C2和MERS-RBD的复合物结构,阐明了4C2的中和机制主要是由于4C2与MERS-RBD结合形成空间位阻及4C2竞争性结合CD26与MERS-RBD结合界面的氨基酸。根据结构对4C2进行了人源化改造并初步验证了抗体人源化后的效果。实验结果表明抗体2E6、4C2以及4C2人源化抗体(4C2h)都是针对RBD的有效抑制剂,有希望可以作为预防和治疗MERS冠状病毒感染的候选抗体。