功能位外固定对兔跟腱损伤术后NF-κB通路相关基因表达影响的研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kelly_0810
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目的建立兔跟腱急性损伤修复术后功能位石膏固定模型,探讨功能位外固定对兔跟腱损伤术后细胞核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路相关基因表达的影响。方法对清洁级成年新西兰大耳白兔右下肢实施“跟腱急性断裂造模+跟腱断裂修复手术”,跟腱断裂修复后进行功能位石膏外固定(A组)和踝关节伸直位石膏外固定(B组)的处理,同时设立仅切开皮肤不进行跟腱损伤的假手术组(C组)。跟腱断裂修复术后1、3、5、7、14、28天(days,d)取跟腱组织以及外周血;并根据粘附评分标准对动物跟腱粘连程度进行分级,统计各分级内的动物数目;RT-PCR法检测肌腱组织中NF-κB抑制因子(IκB)的磷酸化激酶α(inhibitor of NF-κB kinase alpha,IKKα)和NF-κB P65 m RNA,以磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为内参基因。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)法检测动物血清中NF-κB水平。采用SPSS13.0对所获得的数据进行统计分析。各组数据均以均数±标准差表示,组间数据比较采用Student-t检验,组内数据比较采用方差分析,百分比数据比较采用卡方检验。检验水准α=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。结果各组新西兰大耳白兔从手术后到整个实验结束均未出现死亡情况;伤口有良好的愈合效果,且所有动物均未出现伤口感染。实验所用的石膏坚韧且牢固,未出现异常。A组中1级跟腱粘连的动物数占10%,2级占80%,3级占5%,4级占5%,而5级为0%;B组中1级跟腱粘连的动物数占0%,2级占20%,3级占50%,4级占30%,而5级为0%;与B组比,A组的粘连等级明显低于B组。RT-PCR结果:从1 d到28 d,A组和B组跟腱组织内的IKKα(P=0.042,P=0.020)与NF-κB P65 m RNA(P=0.039,P=0.018)均随时间增加而增高。从3 d起至28 d,与B组比,A组IKKα与NF-κB P65m RNA的水平均低于B组(均P<0.05)。ELISA结果与RT-PCR结果一致,从1 d到28 d,A组和B组血清内NF-κB水平随时间增加而增高(P=0.033,P=0.014)。从3 d起至28 d,与B组比,A组NF-κB的水平均低于B组(均P<0.05),A组在28 d时NF-κB的水平恢复至C组水平。结论(1)实验兔跟腱急性损伤修复术后血清中的NF-κB随着修复手术时间降低;(2)NF-κB P65和IKKα的转录水平随着修复手术时间逐渐下调;(3)石膏功能位外固定对兔的跟腱损伤修复后跟腱粘连程度低于传统伸直位外固定;(4)石膏功能位外固定组跟腱组织NF-κB P65和IKKα的转录水平和血清NF-κB水平低于传统伸直位外固定组。
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