【摘 要】
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本研究对转入抗螟虫基因cry2A*的HD4品系进行Basta抗性筛选、PCR检测、GICA检测、室内离体茎秆抗虫性鉴定、Southern blot检测、RT-PCR检测、ELISA检测鉴定,选择出了目的基因
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本研究对转入抗螟虫基因cry2A*的HD4品系进行Basta抗性筛选、PCR检测、GICA检测、室内离体茎秆抗虫性鉴定、Southern blot检测、RT-PCR检测、ELISA检测鉴定,选择出了目的基因PCR呈阳性、目的基因产物表达量高、外源基因低拷贝整合、Bt基因转录及翻译水平较高、抗螟虫性强的转基因抗虫超级粳稻品系。主要研究结果包括:1、根据农杆菌介导法EHA105(pBar-cry2A*)和(pBar-cry1C*)混合菌液,转化水稻品种超级粳稻松粳9号。从转化水稻135个不同独立抗性愈伤组织的单株开始,以抗Basta、外源cry2A*基因及bar基因PCR检测阳性、源cry2A*基因GICA检测阳性、生长发育正常为原则,经过T0、T1至T4代选择,培育成功了 49个转育水稻品系HD4(bar-cry2A*),即HD4品系。2、对选取8个HD4品系进行Bt基因的RT-PCR检测,RNA水平上目的基因表达最强的是HD4-8和HD4-1,最弱的是HD4-5。对选取的8个品系进行Bt蛋白定量检测,结果与Bt基因mRNA表达水平类似,这8个品系在Bt蛋白含量上也有差异,并且Bt蛋白含量最高的是HD4-8和HD4-1,最低的是HD4-5;其中,根据不同器官造成的Bt蛋白含量差异的强弱趋势是叶片>幼穗>茎鞘>糙米。3、对选取的HD4各品系进行Southern blot鉴定,检测出了各个株系的Bt基因及bar基因的拷贝数,发现具有较强抗虫性的株系中Bt基因的拷贝数均为1～3个。4、对选取8个HD4品系进行室内抗螟虫鉴定,其中抗虫性最强的是HD4-8,最弱的是HD4-2和HD4-5。与RT-PCR表达检测结果和Bt蛋白定量检测结果一致。
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