前言 在老年多器官衰竭(muldpie organ falure in the elderly MOFE)的临床和实验研究基础上，老年多器官功能不全综合症(muldple organ dysfunction syndrome in thc elderly MODSE)吸引了越来越多学者的注意。随着年龄的增长及多种慢性疾病的困扰，老年人的器官功能常处于功能不全的临界状态，在某些并不强烈的因素诱发下，两个或两个以上器官在短时间内发生序惯性或同时出现功能不全，这是老年重症多器官衰竭病人的主要死亡原因。 在二十世纪七、八十年代，多器官功能衰竭(MOP)和多器官功能不全(MODS)引起世界各地学者的广泛关注，人们对此进行了广泛的研究，认为在休克和脓毒血症中胃肠是首先受累器官，肠道细菌移位，“休克肠”启动发生并最终导致“器官休克”、从早期器官休克到晚期(脓毒症期)器官休克。还有学者认为肠启动了这些脓毒症状态，通过“肠-肝-肺”轴导致MOF。任何休克或脓毒症本身就可使肠粘膜屏障通透性增加，反过来又进一步促进了肠道细菌移位，导致细菌或细菌毒性产物如内毒素进入血液循环系统，在肝脏激活枯否氏细胞，分泌致炎因子和低血压调节因子，因此提出了“肠启动”等学说。进入九十年代后，学者们在研究工作中发现这一学说并不能完全解释由休克或毒血症引起的MODS，且长期使用机械通气的患者也有部分病人易发生成人呼吸窘迫综合症(ARDs)，进而发展为MODS。我国学者根据长期的临床经验及基础研究工作结果，发现在老年人中，肺脏常常是首先衰竭的器官，肺炎常是ARDS的诱因，这常是MOFE的早期表现。因肺炎需在ICU治疗的病人有10％发展为ARDS。在内毒素、低灌注所致的MOF老年大鼠中，肺脏常首先受累。在致炎因子酵母多糖所致MOF大鼠模型申，肺衰竭出现最早、最明显，表现为严重的充血、出血、间质及肺泡水肿等。从这些临床及实验研究中，推测MOFE中肺脏是启动器官这一理论。 机体受到内毒素等打击后，首先激活单核细胞和巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor α，TNF-α)和白细胞介素1(interleukin 1，IL-1)，TNF-α和IL-1被认为是脓毒症休克的中心调节因子，一方面可促使产生有利于机体的反应，如通过白细胞介素6(interleuldn 6，IL-6)产生急性期反应蛋白，以对抗蛋白酶的消化作用；通过白细胞介素4(interleukin 4，IL-4)、白细胞介素10(interleukin 10，Il-10)、可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型和Ⅱ型受体(soluble Tumor Necrosis Factor receptor Ⅰ-Ⅱ，sTNFR Ⅰ-Ⅱ)，以及白细胞介素1的a受体(inteneubn 1 receptor a、IL-1Ra)产生对抗炎症反应细胞因解放军总医院博士后出站报告子的作用;还可通过巨噬细胞、T和B淋巴细胞、中性拉细胞清除内毒素。另一方面也产生不利于机体的反应，如通过产生白细胞介素8(interleukin8，IL一8)、补体、血小板激活因子(Platelet一activating factor， pAF)、组胺等因子对机体产生不利的作用，另外，TNF-a和IL一1本身即可损伤微循环、心、肺、肾等重要脏器，导致器官及组织功能不全。MOFE的发生发展过程是上述两种力量相互作用的过程，称为系统性炎症反应综合症(syste而cinflammato叮responses”drome，SIRS)。两种力量的对比决定疾病的转归，当有利的一面占主导地位，机体即好转，反之则发生MOFE。那么当SIRS发生后，这些调节因子是怎样引起心功能不全的，目前机制尚不清楚，.本研究通过研究细胞因子肿瘤坏死因子仃NF.a)对培养的衰老心肌细胞的线粒体膜电位、胞内钙离子浓度[C扩‘]i的变化及细胞凋亡现象，探讨其在心肌细胞损伤中的作用及潜在的阻断机制。 第一部分心肌细胞培养及衰老模型的建立 目的:生物体作为整体衰老过程的研究有一些难以克服的障碍。另外，要将正常的衰老与生命过程中的疾病效应相区分存在很大困难。体外培养的衰老细胞是一个简化的，在控制条件下具有吸引力的机体衰老研究模型。近年来，国内外学者根据衰老理论发展了众多的衰老模型，整体的有自然衰老模型、去胸腺衰老模型、直接采用老龄动物作自然衰老模型、快速老化模型小白鼠制备快速衰老模型以及注射大剂量的D一半乳糖所致的亚急性衰老模型，细胞水平的有体外传代复制衰老模型、TNF-五诱导法、D一半乳糖致衰老模型等。其中D一半乳糖致细胞衰老模型是我国学者在9()年代建立的川一，21，目前已成功用于诱导成纤维细胞、神经元细胞等，但关于心肌细胞的衰老模型尚未见报道，本研究的目的是了解D一半乳糖是否也能致心肌细胞衰老。 方法:采用胶原酶消化法分离培养乳鼠心肌细胞，待心肌细胞生长稳定后D一半乳糖诱导衰老，对照组用D一葡萄糖处理，倒置显微镜观察心肌细胞跳动的频率、形态。流式细胞术、应一半乳糖昔酶法鉴别细胞衰老。 结果:倒置显微镜下观察到D一半乳糖诱导的心肌细胞体积增大、扁平，跳动频率减缓，后期细胞代谢也减缓。HE染色结果显示，年轻心肌细胞胞浆红染，着色均匀，诱导的心肌细胞胞体增大，形状扁平，胞装区域增大，可见颗粒增多，着色不均。细胞内冬半乳糖谷酶活性是非常特征性的衰老监测指标，可见D一半乳糖诱导心肌细胞出现冬半