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植物细胞骨架是高度动态的网络体系,主要包括微丝和微管两种组分。植物细胞骨架能够参与多种生物学过程,例如,维持细胞形态,胞内物质运输、胞质分裂。而行使这些生物学功能往往依赖于微丝和微管的相互协作。但是在这些生物学过程中,微丝和微管的协作机制还尚不清楚。 本学位论文的研究对象MAP190是首先发现于烟草中,既能够结合微丝又能够结合微管的蛋白。但是该蛋白与微管和微丝协作的机制以及MAP190在胞内的生物学功能仍不清楚。为了解决以上问题,我们选取了材料丰富,便于进行遗传学和基因组学操作的拟南芥(Arabidopsis thaliana)对MAP190基因进行细致研究。首先通过序列比对发现,在拟南芥中我们找到了与烟草中MAP190高度同源的唯一成员AtMAP190。起初我们需要验证AtMAP190在体外是否与微丝和微管能够直接结合,但由于通过尝试原核表达系统未能成功对AtMAP190体外全长蛋白进行表达,因此我们采取了将AtMAP190全长蛋白覆盖性截短成4部分的方法,利用大肠杆菌分别进行体外重组表达。通过体外生化实验,结果表明位于全长蛋白第700-959位氨基酸,被命名为CEC260(center-C terminus260)蛋白能够使微丝和微管同时成束。这暗示着AtMAP190与烟草中MAP190具有相似功能,同样能够引起微丝和微管互作。为了解析AtMAP190与微丝和微管的结合方式,通过将CEC260蛋白进一步截短,进行生化实验,发现位于全长蛋白的第751-757位氨基酸、第800-806位氨基酸和第831-837位氨基酸存在三个高度保守基序,这些基序的存在对于微丝的成束作用是重要的。同时,这也暗示了三个基序可能构成了AtMAP190与微丝的结合位点。对于AtMAP190的微丝结合位点的研究将帮助我们理解AtMAP190与微丝的结合方式,同时也为进一步解析AtMAP190与微丝和微管的互作机制奠定基础。 为了解析AtMAP190可能的生物学功能,我们对AtMAP190功能完全缺失的T-DNA插入突变体map190进行表型观察,发现map190具有胚胎细胞排列不整齐的表型。我们猜测AtMAP190可能参与细胞分裂或是细胞伸展的过程。为了验证我们的猜想,通过利用表达AtMAP190-EGFP的互补株系观察AtMAP190是否能够与体内的微丝和微管形成共定位。但是,出乎我们意料的是,AtMAP190定位于细胞核中,不与微丝和微管共定位。基于以上实验结果,虽然我们目前还无法解释作为能够连接微丝和微管的互作蛋白,却又定位于细胞核中的AtMAP190是如何调控细胞质中微丝和微管,但是我们猜测,细胞核中的AtMAP190可能对于微丝和微管的相互作用存在新机制。